[發明專利]一個用于區分五個辣椒栽培種的InDel標記引物對及其應用

有效

• 申請號: 201810499212.7
• 申請日: 2018-05-23
• 公開（公告）號: CN108517373B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 郭廣君;王述彬;潘寶貴;劉金兵;刁衛平;戈偉;高長洲
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;夏平

1.SEQ ID NO.1和 SEQ ID NO.2所示的Indel標記引物對在區分五個辣椒栽培種中的應用，其特征在于以提取的辣椒基因組DNA為模板，利用SEQ ID NO.1和 SEQ ID NO.2所示的Indel標記引物對進行PCR擴增，對PCR擴增 產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，如果有133bp的分子標記譜帶，則為一年生辣椒(Capsicum annuum)；如果有135 bp的分子標記譜帶，則為灌木狀辣椒（Capsicum frutescens）；如果有138 bp的分子標記譜帶，則為中國辣椒（Capsicum Chinese）；如果有141 bp的分子標記譜帶，則為下垂辣椒（Capsicumbaccatum）；如果有148 bp的分子標記譜帶，則為柔毛辣椒（Capsicum Pubescens）。

2.一個區分五個辣椒栽培種的Indel標記方法，其特征在于包括以提取的辣椒基因組DNA為模板，利用SEQ ID NO.1和 SEQ ID NO.2所示的Indel標記引物對進行PCR擴增，對PCR擴增 產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，如果有133 bp的分子標記譜帶，則為一年生辣椒(Capsicum annuum)；如果有135 bp的分子標記譜帶，則為灌木狀辣椒（Capsicumfrutescens）；如果有138 bp的分子標記譜帶，則為中國辣椒（Capsicum Chinese）；如果有141 bp的分子標記譜帶，則為下垂辣椒（Capsicum baccatum）；如果有148 bp的分子標記譜帶，則為柔毛辣椒（Capsicum Pubescens）。

3.根據權利要求2所述的區分五個辣椒栽培種的Indel標記方法，其特征在于PCR反應體系：50 ng/μl的DNA模板0.5μl；10 μmol/L的權利要求1中所述的引物對0.5μl；10×PCRbuffer 1.0μl；25 mmol/L MgCl₂ 1.0μl；10mmol/L dNTPs 0.25μl；5U/μl Taq DNAPolymerase 0.1μl；ddH₂ O 6.65μl；或者采用50 ng/μl的DNA模板0.5μl；10 μmol/L的引物對0.5μl ；2×GoTaq?GreenMaster Mix 5μl；ddH₂ O 3μl；反應程序：94℃預變性3 min；每個循環94℃變性20 sec，55℃退火 30 sec，72℃延伸40 sec，共30個循環；最后72℃延伸7min。