[發(fā)明專利]一種瓜氨酸修飾肽及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810496958.2
• 申請日: 2018-05-22
• 公開（公告）號: CN108948154A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設計）人: 于曉波;王紅葉
• 申請（專利權）人: 北京蛋白質組研究中心
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 張丹

本發(fā)明提供了一種瓜氨酸修飾肽抗原及包括瓜氨酸修飾肽抗原的組合物。本發(fā)明還提供了瓜氨酸修飾肽抗原或包括瓜氨酸修飾肽抗原的組合物在制備檢測抗瓜氨酸修飾肽IgG抗體和/或IgA抗體的診斷工具中的用途。本發(fā)明所述的瓜氨酸修飾肽抗原用于檢測IgG抗體和/或IgA抗體標志物，解決了臨床30％的RA患者缺少明確標志物的問題。本發(fā)明提供的診斷工具采用新型類風濕關節(jié)炎相關生物標志物的自身抗體所對應的抗原，檢測人血清中自身抗體，具有特異性好、靈敏度高、準確性好、線性范圍廣、安全、可靠、易操作的優(yōu)點，尤其適用當前臨床CCP2無法檢測的陰性類風濕關節(jié)炎患者的篩選和診斷。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學技術領域，具體涉及抗瓜氨酸修飾肽IgG抗體和/或IgA抗體血清學檢測技術，特別是涉及瓜氨酸修飾肽抗原、診斷工具或其制備方法及在CCP陰性類風濕關節(jié)炎患者自身抗體檢測中的應用。

背景技術

類風濕關節(jié)炎(RA，Rheumatoid Arthritis)是最常見的全身性自身免疫疾病之一，世界范圍約0.5～1％人群罹患此病。RA是系統(tǒng)性自身免疫疾病，患者常伴隨關節(jié)慢性炎癥反應，遭受疾病慢性過程，可導致進行性關節(jié)破壞、骨侵蝕、畸形等。類風濕關節(jié)炎RA最重要的血清學發(fā)現：患者血清中含有特異識別瓜氨酸修飾蛋白的自身抗體。約70％的RA患者血清中含有識別瓜氨酸修飾蛋白自身抗體(ACPA，Anti-citrullinated proteinantibody)，這些瓜氨酸修飾蛋白被稱為自身抗原。ACPAs抗體檢測是RA診斷金標準重要檢測指標。

研究表明抗瓜氨酸修飾蛋白自身抗體的產生伴隨RA患者疾病進程，在臨床診斷方面，ACPAs對RA患者有很高的特異性和靈敏度，對RA早期患者也有著較高的靈敏度。對于超早期RA患者，其顯示臨床癥狀之前，甚至十幾年前，就能檢測到瓜氨酸自身抗體存在。同時抗瓜氨酸自身抗體對RA患者預后有重要作用，可預測疾病發(fā)展狀態(tài)。75％類風濕關節(jié)炎患者確診1～2年內，會發(fā)生不可逆骨關節(jié)侵蝕，ACPAs抗體陽性較ACPAs抗體陰性RA患者骨侵蝕程度更嚴重，ACPAs抗體水平越高，RA患者發(fā)病時間越短。

目前臨床使用商業(yè)化環(huán)瓜氨酸肽(CCP，cyclic citrullinated peptide)檢測試劑盒作為RA患者輔助診斷檢測方法，CCP檢測試劑盒可以檢測患者血清中抗環(huán)瓜氨酸修飾肽自身抗體。第一代瓜氨酸檢測試劑盒CCP1，抗原來自絲聚合蛋白原(Profilaggrin)，使用Elisa檢測方法，包被絲聚合蛋白原瓜氨酸修飾肽作為抗原，檢測患者血清中瓜氨酸修飾蛋白自身抗體。基于CCP1檢測試劑盒，開發(fā)了CCP2檢測試劑盒，對CCP1瓜氨酸修飾肽進行改造，將多肽序列中兩個絲氨酸替換為半胱氨酸，合成環(huán)瓜氨酸修飾肽即CCP(cycliccitrullinated peptide)，不僅增加了抗原的穩(wěn)定性，同時也提高了CCP檢測的靈敏度和特異性。CCP2商品化檢測試劑盒于2002年上市，并迅速廣泛的應用于臨床檢測，現在仍然是RA檢測臨床最常用金標準。目前至少有六種常見試劑盒，分別來自Axis-Shield(US)、Euro-Diagnostica(The Netherlands)、Euroimmun(Germany)、Inova(US)、Phadia(Sweden/Germany)、Abbott(US)。CCP2檢測試劑盒基于同一種CCP2抗原肽，在檢測方面有稍許差別，檢測靈敏度為66.7％～77.7％，特異性為86.1％～98.8％。