[發明專利]鹿胎多重PCR-RFLP-CE DNA指紋圖譜及鑒定方法在審
| 申請號: | 201810496611.8 | 申請日: | 2018-05-22 |
| 公開(公告)號: | CN108676895A | 公開(公告)日: | 2018-10-19 |
| 發明(設計)人: | 周亭亭;苑廣信;艾金霞;王雪松;王艷雙 | 申請(專利權)人: | 北華大學 |
| 主分類號: | C12Q1/6888 | 分類號: | C12Q1/6888;C12Q1/683;C12Q1/686 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 132013 吉林*** | 國省代碼: | 吉林;22 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 鹿胎 中藥材 限制性片段長度多態性分析 多重聚合酶鏈式反應 毛細管電泳技術 自動化分析 高穩定性 真偽鑒定 多重PCR 靈敏度 分辨率 應用 | ||
1.一種中藥材鹿胎DNA鑒定方法,其特征在于:所述方法采用多重PCR(多重聚合酶鏈式反應)、RFLP(限制性片段長度多態性分析)結合CE(毛細管電泳技術)建立鹿胎DNA指紋圖譜及鑒定方法,可以快速準確的鑒別鹿胎樣品真偽。
2.一種如權利要求1中所述中藥材鹿胎DNA鑒定方法,其特征在于:
包括以下步驟:
1)DNA提取:取鹿胎樣品,按鹽析法提取其DNA;
2)多重PCR擴增:A上游引物1ul;A下游引物1ul;B上游引物1ul;B下游引物1ul;Taq聚合酶12.5ul;所提取DNA樣品2ul;ddH2O 6.5ul,總體積25ul;
3)PCR產物純化:吸取稀釋后的PCR產物1.0 μl注入進樣板,加滅菌雙蒸水9.0 μl使總體積至10 μl,離心;再加入30 μl乙醇乙酸鈉,8℃、3600r/min離心30 min;棄上清液,加入50 μl 70%乙醇漂洗1次,置于室溫晾干;
4)PCR產物鑒定:擴增產物進行RFLP(限制性片段長度多態性分析)鑒定;
5)將RFLP產物進行CE(毛細管電泳)分析,記錄電泳圖譜;并構建鹿胎多重PCR-RFLP-CEDNA指紋圖譜。
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