[發(fā)明專利]一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑及其制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810496205.1 | 申請(qǐng)日： | 2018-05-22 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN109939128A | 公開（公告）日： | 2019-06-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王光輝;張敏娜;鐘鳴;王慧云;王其寶;丁林 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | A61K35/28 | 分類號(hào)： | A61K35/28;A61K38/18;A61P25/00;A61K31/7016 |
| 代理公司： | 北京集智東方知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11578 | 代理人： | 張紅;程立民 |
| 地址： | 272067 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 間充質(zhì)干細(xì)胞 神經(jīng)干細(xì)胞制劑 制備 表皮生長因子 培養(yǎng)基 海藻糖 成纖維細(xì)胞生長因子 堿性成纖維生長因子 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞膜 神經(jīng)干細(xì)胞球 神經(jīng)細(xì)胞 充質(zhì)干細(xì)胞 單細(xì)胞懸液 干細(xì)胞制劑 海藻糖溶液 細(xì)胞 消化 神經(jīng)損傷 體外培養(yǎng) 干細(xì)胞 滲透壓 消化液 吹打 中止 篩選 受損 分化 修復(fù) 治療 保證 | ||
1.一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑，其特征在于，包括間充質(zhì)干細(xì)胞、海藻糖溶液、表皮生長因子和堿性成纖維生長因子，所述間充干細(xì)胞為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞或脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞為P3代-5代的間充質(zhì)干細(xì)胞；
所述充質(zhì)干細(xì)胞用消化液消化后加入培養(yǎng)基中止消化，離心后加入培養(yǎng)基機(jī)械吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液，在CO2、37℃下經(jīng)過體外培養(yǎng)，篩選出神經(jīng)干細(xì)胞球，即得到神經(jīng)干細(xì)胞制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑，其特征在于，所述的消化液可以采用的胰蛋白酶+的EDTA、胰蛋白酶或膠原酶中的一種；其中胰蛋白酶用量為0.1wt％-0.5wt％、膠原酶150u/m1-250u/m1，EDTA的用量為0.005-0.02wt％；優(yōu)選消化液為胰蛋白酶0.25％或0.25％胰蛋白酶+0.01％EDTA。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑，其特征在于，所述的中止消化的培養(yǎng)基為DMEM/F12+10-20V％胎牛血清、DMEM+10-20V％胎牛血清中的一種，培養(yǎng)基的用量為25-70ml；優(yōu)選采用DMEM/F12+10-20V％胎牛血清。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑，其特征在于，所述海藻糖溶液的濃度為50-90mg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑，其特征在于，干細(xì)胞制劑中間充質(zhì)干細(xì)胞的濃度為106-109個(gè)細(xì)胞/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑，其特征在于，干細(xì)胞制劑中表皮生長因子的濃度為10-15ng/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑，其特征在于，干細(xì)胞制劑中堿性成纖維生長因子的濃度為15-20ng/mL。
8.一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑的制備方法，包括以下步驟：
1)、對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行分離純化，傳代培養(yǎng)，取P3代-P5代間充質(zhì)干細(xì)胞；
2)、對(duì)P3代-P5代間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行病毒、無菌、免疫表型、細(xì)胞活率、分化功能的檢測(cè)，各項(xiàng)指標(biāo)合格后用于干細(xì)胞制劑的制備；
3)、收集并純化間充質(zhì)干細(xì)胞，重懸于海藻糖溶液內(nèi)，海藻糖溶液濃度為50-90mg/mL，海藻糖溶液中含間充質(zhì)干細(xì)胞106-109個(gè)/mL，添加表皮生長因子和堿性成纖維生長因子，即可得到干細(xì)胞制劑；所述間充質(zhì)干細(xì)胞為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞或脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，步驟2)所述各項(xiàng)指標(biāo)合格是指：病毒和無菌檢測(cè)均為陰性，免疫表型的陽性表達(dá)率大于95％，陰性表率達(dá)小于2％，細(xì)胞活率達(dá)到95％以上，具有分化功能。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種神經(jīng)干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，步驟3)中海藻糖溶液濃度為60-80mg/mL，干細(xì)胞制劑中表皮生長因子的濃度為10-15ng/mL，干細(xì)胞制劑中堿性成纖維生長因子的濃度為15-20ng/mL。
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