[發明專利]一種提高水稻耐鹽能力的方法

在審

• 申請號: 201810495827.2
• 申請日: 2018-05-22
• 公開（公告）號: CN108660150A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發明（設計）人: 謝先芝;鄭崇珂;解麗霞;周晉軍;孫偉;崔立新;鞠培娜
• 申請（專利權）人: 山東省水稻研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

1.一種提高水稻耐鹽能力的方法，其特征是，抑制水稻中PHYB基因表達，提高水稻耐鹽能力。

2.如權利要求1所述的一種提高水稻耐鹽能力的方法，其特征是，包括以下步驟：

1)合成水稻PHYB基因高度特異的雙鏈spacer DNA序列，再連接到pOs-sgRNA載體；

2)然后通過LR反應整合在pH-Ubi-Cas9-7雙元載體上，獲得PHYB基因的CRISPR/Cas9植物表達載體；

3)再利用農桿菌介導的遺傳轉化方法將PHYB基因的CRISPR/Cas9植物表達載體轉化至水稻中，獲得耐鹽性提高的轉基因株系；

4)然后轉基因株系和受體水稻進行回交，獲得F1代水稻種子；F1代水稻自交后，篩選沒有載體序列、只有PHYB基因靶序列變異的轉基因純合株系。

3.如權利要求2所述的一種提高水稻耐鹽能力的方法，其特征是，所述步驟1)基因高度特異的雙鏈spacer DNA序列的獲取方式為：在水稻PHYB基因外顯子區域尋找合適的spacer序列，得到的spacer序列的5’端加上ggca，其互補序列的5’端加上aaac，合成雙鏈spacerDNA序列。

4.如權利要求3所述的一種提高水稻耐鹽能力的方法，其特征是，所述基因高度特異的雙鏈spacer DNA序列為：spacer 1、spacer 2；

spacer 1正向序列PHYB-CRISPR-F1：5’-GGCACCACGCCGTGTTCGAGCAGT-3’；

spacer 1互補反向序列PHYB-CRISPR-R1：5’-AAACACTGCTCGAACACGGCGTGG-3’；

spacer 2的正向序列PHYB-CRISPR-F2：5’-GGCAAATAACCTTGAGCCCTACAT-3’；

spacer 2的互補反向序列PHYB-CRISPR-R2：5’-AAACATGTAGGGCTCAAGGTTATT-3’。

5.如權利要求4所述的一種提高水稻耐鹽能力的方法，其特征是，所述步驟1)雙鏈spacer DNA序列接到pOs-sgRNA載體，具體為：采用BsaⅠ酶切pOs-sgRNA載體，回收線性pOs-sgRNA載體，然后用T4連接酶連接spacer1或spacer 2片段和回收的線性pOs-sgRNA載體。

6.如權利要求1所述的一種提高水稻耐鹽能力的方法，其特征是，所述步驟3)的水稻為鹽豐47栽培水稻。