[發明專利]腫瘤標志物、甲基化試劑、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201810494989.4
• 申請日: 2018-05-22
• 公開（公告）號: CN110511998A
• 公開（公告）日: 2019-11-29
• 發明（設計）人: 劉相林;趙榮淞;鄒鴻志
• 申請（專利權）人: 廣州市康立明生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 11227 北京集佳知識產權代理有限公司
• 代理人: 張柳;趙青朵<國際申請>=<國際公布>=

本發明涉及生物技術領域，特別涉及腫瘤標志物、甲基化試劑、試劑盒及其應用。本發明通過研究發現：通過檢測COL4A2基因啟動子區的甲基化水平，可以很好的從正常人的糞便標本中區分出結直腸癌標本。本發明就是利用含有該基因的甲基化試劑來檢測結直腸癌的，并且對腸癌的檢測敏感性和特異性非常高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及腫瘤標志物、甲基化試劑、試劑盒及其應用。

背景技術

結直腸癌，又稱為大腸癌，是一種常見的消化道惡性腫瘤。其發病率在我國逐年升高，在我國部分沿海地區比如上海和廣州，大腸癌發病率已躍居第二位，僅次于肺癌。目前認為腸癌的形成是遺傳缺陷和表觀遺傳缺陷累積的結果。結直腸癌早期發病隱匿，常無明顯癥狀，晚期可出現便血、腹痛、腹瀉等癥狀。而當出現癥狀就診時常常是晚期，這給病人帶來極大的痛苦和昂貴的治療費用。因此早發現、早診斷、早治療是降低結直腸癌發病率和死亡率的一項重要措施。

篩查可以早期發現腸癌和癌前病變，并去除病灶，從而阻止腸癌的發生。目前大腸癌的篩查方法主要有隱血試驗和腸鏡檢查。隱血試驗存在易受食物影響或對腺瘤檢出率不高的問題。腸鏡雖是腸癌診斷金標準，但作為篩查手段使用時人群依從性不高。因此急需一種準確性高、依從性高的腸癌篩查方法。

糞便基因檢測作為一種新的腸癌篩查方法，現在越來越受到重視。該方法于2016年納入美國的腸癌篩查指南。該方法具有方便、無創、對腸癌和癌前病變腺瘤的檢出率高等特點。要做成對腸癌檢測高性能的糞便基因檢測試劑盒，主要需要克服兩大障礙：糞便DNA的提取和標志物選擇。一方面，糞便中成分復雜，對下游反應的抑制物多，還有許多細菌DNA，要從這樣的混合物中提取出人的目標基因，需要一套高敏的基因提取和純化方法；另一方面，目前和腸癌相關的標志物很多，尤其是DNA甲基化標志物，因為研究表明，DNA甲基化是腫瘤形成的早期事件。但很多甲基化標志物在細胞、組織層面表現很好，當用于糞便、血液等篩查媒介時，其對腸癌的敏感性和特異性就降下來了，比如vimentin基因，其在組織中的敏感性有83％，在糞便標本中就降到了46％，類似的還有SFRP1、SFRP2等基因，這樣的標志物無法滿足真正用于腸癌臨床檢測的需求。因此，挑選在糞便中對腸癌有極高檢測敏感性和特異性的標志物是腸癌糞便基因檢測的關鍵，并且這樣的標志物有望真正用于腸癌的臨床檢測。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種腫瘤標志物、甲基化試劑、試劑盒及其應用。該腫瘤標志物在糞便中對腸癌的敏感性與組織中敏感性接近。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了COL4A2基因在制備腫瘤標志物中的應用。

在本發明的一些具體實施方案中，所述腫瘤為結直腸腫瘤。

在本發明的一些具體實施方案中，所述腫瘤為結直腸癌或腺瘤。

在本發明的一些具體實施方案中，待測樣本為組織、體液或排泄物。

在本發明的一些具體實施方案中，所述體液包括細胞外液、組織液、血液、淋巴液、腦脊液或房水。

在本發明的一些具體實施方案中，所述排泄物為痰液、尿液或糞便。

本發明還提供了COL4A2基因的甲基化試劑，包括針對COL4A2基因的CpG島獲得的捕獲序列、引物和/或探針。

在本發明的一些具體實施方案中，本發明提供的甲基化試劑包括針對COL4A2基因的啟動子區或所述啟動子區附近區域的CpG島獲得的捕獲序列、引物和/或探針。

在本發明的一些具體實施方案中，本發明提供的甲基化試劑中所述捕獲序列具有如下所示的核苷酸序列中的任意一項：

Ⅰ、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；