[發明專利]一種提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法

在審

• 申請號: 201810494617.1
• 申請日: 2018-05-22
• 公開（公告）號: CN108642109A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 劉秀霞;高雄;孫曼曼;張偉;董貴賓;楊艷坤;白仲虎
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N15/77;C12R1/15
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王曉東

本發明公開了一種提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法，其包括，在谷氨酸棒桿菌培養基中加入體積濃度為0.5％～10％的乙醇。本發明顯著提高了谷氨酸棒狀桿菌的生長和蛋白表達產量，本發明方法綠色環保無毒害、操作簡單、成本低、效果好、顯著提高谷氨酸棒桿菌的蛋白表達產量，具有巨大的工業應用價值。本發明在培養基中添加1％乙醇促進谷氨酸棒桿菌的生長，同樣培養條件下，谷氨酸棒桿菌的重組蛋白表達量提高一倍以上。

技術領域

本發明屬于基因工程和代謝工程技術領域，具體涉及一種提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法。

背景技術

谷氨酸棒桿菌是一種非致病的革蘭氏陽性菌，廣泛用于工業生產高級醇、氨基酸、有機酸等工業產品；谷氨酸棒桿菌的基因組數據和注釋在2003年完成，為該表達系統的優化提供了新的思路和支撐。日本Ajinomoto公司從上世紀90年代末就開始研究谷氨酸外源表達系統，近10年來已經有多種真核和原核蛋白在谷氨酸棒桿菌中高效表達，例如：胰島素、人源Fab抗體片段等。作為一種外源表達蛋白表達宿主與大腸桿菌相比，谷氨酸棒桿菌具有一些特別的優勢，如無內毒素、蛋白分泌能力強等；但是谷氨酸棒桿菌表達系統表達效率明顯低于大腸桿菌。在谷氨酸棒桿菌表達系統中，目前用于工業生產表達蛋白的谷氨酸棒桿菌主要通過傳統誘變或基因工程的方法獲得，但這些方式主要通過改造宿主菌株來提高產量，很難做到普適性；而且很多操作局限于實驗室而無法大規模應用。

因此，如何尋找一種能夠提高谷氨酸棒桿菌外源蛋白表達量的方法是本領域有待解決的技術問題。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述的技術缺陷，提出了本發明。

因此，本發明克服現有技術中存在的不足，提供一種提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法，其特征在于：包括，在谷氨酸棒桿菌培養基中加入體積濃度為0.5％～10％的乙醇。

作為本發明所述的提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法的一種優選方案：在谷氨酸棒桿菌培養基中加入體積濃度為0.5％～3％的乙醇。

作為本發明所述的提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法的一種優選方案：所述重組蛋白，包括由含有Ptac啟動子、Ptrc啟動子、Plac啟動子、Paph啟動子、Pgro啟動子的質粒載體所表達的重組蛋白。

作為本發明所述的提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法的一種優選方案：所述質粒載體，包括pXMJ19、pEC-XK99E、pDXW-8、pDXW-9。

作為本發明所述的提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法的一種優選方案：所述重組蛋白包括增強型綠色熒光蛋白、淀粉酶α、腦鈉肽、VHH、ScFV。

作為本發明所述的提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法的一種優選方案：所述培養基，包括LB培養基、LBB培養基、LBG培養基、TBSB培養基、LBHIS培養基、BHI培養基。

作為本發明所述的提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法的一種優選方案：培養所述谷氨酸棒桿菌時，培養溫度為30℃，搖床轉速為200r/min。

作為本發明所述的提高谷氨酸棒桿菌重組蛋白表達量的方法的一種優選方案：所述重組蛋白，包括由含有異檸檬酸裂合酶編碼基因的啟動子的質粒載體所表達的重組蛋白。