[發明專利]一種防治新型鴨呼腸孤病毒的卵黃抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 201810494056.5
• 申請日: 2018-05-22
• 公開（公告）號: CN108676092B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 唐熠;刁有祥;高斌
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 李茜

1.一種防治新型鴨呼腸孤病毒的卵黃抗體，其特征在于，所述卵黃抗體是以滅活的保藏編號為CCTCC NO：V201818的鴨呼腸孤病毒作為抗原制備的疫苗免疫蛋雞，然后從高免雞蛋蛋黃中提取純化得到。

2.權利要求1所述卵黃抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）用保藏編號為CCTCC NO：V201818的鴨呼腸孤病毒作為疫苗生產毒株，制成滅活疫苗；

（2）用制備的滅活疫苗注射免疫產蛋雞，制備高免蛋；

（3）由高免蛋收集卵黃，經一次滅活、酸化萃取、二次滅活、粗濾、除菌過濾、濃縮和三次滅活后制備成防治新型鴨呼腸孤病毒的卵黃抗體。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述滅活疫苗由如下方法制備而成：

將保藏編號為CCTCC NO：V201818的鴨呼腸孤病毒接種SPF雞胚，收集24-120h內死亡雞胚尿囊液，獲得病毒液；將病毒液濃縮至病毒含量≥10^5.0ELD₅₀，濃縮后的病毒液經甲醛滅活，加入Tween-80混合作為水相，以白油、硬脂酸鋁和Span-80混合作為油相，將水相和油相按體積比1:1混合，乳化，制得滅活疫苗。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，用制備的滅活疫苗分4次對產蛋雞進行免疫，每次免疫間隔2周。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述一次滅活具體為：將卵黃液與水按體積比1:(0.5~1.5)混合，攪拌均勻后得到卵黃稀釋液，于60~65℃條件下保溫25~35min。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述酸化萃取具體為：向卵黃稀釋液中加入所述卵黃稀釋液體積2.5~3.5倍的醋酸鹽緩沖液，攪拌后過濾收集濾液；所述醋酸鹽緩沖液的pH值為4.8-5.2。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述醋酸鹽緩沖液的pH值為5.0。

8.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述二次滅活具體為：向酸化萃取后的濾液中加入辛酸至終濃度3.5~4.5%，攪拌30-120min，攪拌后于2~8℃放置4~8小時；

步驟（3）中，所述除菌過濾具體為：用0.22μm濾膜過濾除菌。

9.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述濃縮具體為：利用30-50KD的PES中空纖維超濾膜在2-8℃條件下進行濃縮，至抗體效價不低于1:512。

10.權利要求1所述的卵黃抗體在制備用于預防和/或治療新型鴨呼腸孤病毒感染的制品中的應用；所述新型鴨呼腸孤病毒株的保藏編號為CCTCC NO：V201818。

11.保藏編號為CCTCC NO：V201818的鴨呼腸孤病毒在制備治療由保藏編號為CCTCCNO：V201818的鴨呼腸孤病毒引起的跗關節腫脹的卵黃抗體中的應用。