[發明專利]一種心肌鈣蛋白I的夾心型光電化學傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201810492609.3
• 申請日: 2018-05-22
• 公開（公告）號: CN108828042B
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 孔玲;陳杰;陳志偉;孫曉凱
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種心肌鈣蛋白I的夾心型光電化學傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）將2.5 cm × 0.8 cm的ITO導電玻璃依次用洗潔精、丙酮、無水乙醇和超純水超聲清洗，氮氣吹干；

（2）取8 ~ 10 μL、8 ~ 12 mg/mL的納米正方片二氧化鈦TiO₂懸浮液滴加到導電玻璃電極的導電面，室溫下自然晾干；

（3）在TiO₂修飾的電極表面，滴加4 ~ 5 μL羧基化的硫化鎘CdS量子點溶液，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，制得TiO₂/CdS電極；

（4）在TiO₂/CdS電極表面滴加4 ~ 5 μL、0.1 mol/L的巰基乙酸，室溫下晾干，繼續滴加4~ 5 μL的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺，反應20 ~ 40 min后用超純水沖洗，自然晾干；

（5）在修飾電極表面繼續滴加4 ~ 5 μL、濃度為3 ~ 5 μg/mL的心肌鈣蛋白I抗體溶液，反應20 ~ 40 min后用超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（6）繼續滴加4 ~ 5 μL、質量分數為1 ~ 1.5 %的BSA溶液，以封閉電極表面上非特異性活性位點，反應20 ~ 40 min后用超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（7）繼續滴加3 ~ 5 μL、0.00002 ~ 50 ng/mL的心肌鈣蛋白I抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（8）繼續滴加4 ~ 8 μL、0.3 ~ 1.0 mg/mL的Ag@Cu₂O核殼納米粒子標記的心肌鈣蛋白I抗原的抗體溶液在電極表面與抗原特異性識別，室溫下孵化1 h，清洗干凈，制得一種基于TiO₂/CdS的心肌鈣蛋白I的夾心型光電化學傳感器，于4 ℃冰箱中儲存備用；

所述的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺含1 × 10^-2mol/L的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺和2 × 10^-3 mol/L的N-羥基琥珀酰亞胺；

所述Ag@Cu₂O 核殼納米粒子的制備步驟如下：

（1）30 ~ 40 mg的硝酸銀溶解在180 ~ 220 mL的超純水中，85 ℃回流，攪拌30 min；

（2）在步驟（1）溶液中加入4 mL 1%的檸檬酸三鈉溶液，煮沸30 min，得銀粒子溶液；

（3）在磁力攪拌下，10 ~ 12 g PVP加入到500 mL的0.01 mol/L Cu(NO₃)₂水溶液中，待粉末完全溶解后，滴加40.0 mL銀粒子溶液；

（4）室溫下立即加入340 μL 35% 水合肼溶液，混合物攪拌5 min，用水和無水乙醇清洗Ag@Cu₂O核殼納米粒子，再用無水乙醇分散，4 ℃冰箱中儲存備用。

2.如權利要求1所述的一種心肌鈣蛋白I的夾心型光電化學傳感器的制備方法，所述TiO₂/CdS的制備，其特征在于，步驟如下：

（1）8 ~ 10 mL鈦酸四丁酯中加入0.6 ~ 1.0 mL氫氟酸，攪拌15 ~ 30 min，所得溶液移入聚四氟內襯高壓反應釜中，180 ℃反應22 ~ 26 h，降至室溫，離心、洗滌、真空干燥，得到TiO₂；

（2）把125 μL的巰基乙酸滴加到25 mL的0.01 mol/L CdCl₂水溶液中，通氮氣20 ~ 40min，用1 mol/L氫氧化鈉調pH值為11，把2.5 mL的0.1 mol/L硫化鈉溶液慢慢注入到溶液中，混合物在氮氣的環境下反應4 h，得到羧基化的CdS量子點，4 °C冰箱里儲存待用；

（3）取8 ~ 10 μL、8 ~ 12mg/mL的TiO₂懸浮液滴加到導電玻璃電極的導電面，室溫下自然晾干，繼續滴加4 ~ 5 μL羧基化的CdS量子點溶液，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，制得TiO₂/CdS。

3.如權利要求1所述的一種心肌鈣蛋白I的夾心型光電化學傳感器的制備方法，其特征在于，用于心肌鈣蛋白I特異性抗原的檢測，檢測步驟如下：

（1）使用電化學工作站的三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的心肌鈣蛋白I特異性抗原夾心型光電化學傳感器為工作電極，在PBS緩沖溶液中進行測試，PBS緩沖溶液為10 mL ~ 15 mL、pH為5.0 ~ 8.5的含0.1 mol/L抗壞血酸的磷酸鹽緩沖溶液；

（2）采用時間-電流法對心肌鈣蛋白I特異性抗原溶液進行檢測，設置電壓為0 V，運行時間100 s，激發光源為LED燈，記錄電流變化，繪制工作曲線；

（3）將待測樣品溶液代替心肌鈣蛋白I特異性抗原溶液進行檢測，按照步驟（2）和（3）中的方法進行檢測，根據響應光電流強度I和工作曲線，得到待測樣品中心肌鈣蛋白I的含量。