[發(fā)明專利]一種三疣梭子蟹COMT基因及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810491438.2
• 申請日: 2018-05-21
• 公開（公告）號: CN108642069B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉磊;朱芳;付媛媛;王春琳;母昌考;李榮華;宋微微;史策;葉央芳
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/70;C12N9/10
• 代理公司: 寧波誠源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 張一平;葉桂萍

本發(fā)明涉及一種三疣梭子蟹COMT基因及應(yīng)用，涉及三疣梭子蟹基因工程，該三疣梭子蟹COMT基因基因序列如SEQ NO.1所示，本發(fā)明還提供一種制備三疣梭子蟹三疣梭子蟹COMT基因重組蛋白的方法，其特征在于包括以下步驟：(1)構(gòu)建三疣梭子蟹COMT基因重組表達(dá)載體；(2)將步驟(1)所得重組表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞，并將宿主細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，獲得表達(dá)產(chǎn)物；(3)將分離純化步驟(2)所得的表達(dá)產(chǎn)物，獲得重組蛋白；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：三疣梭子蟹COMT基因可能廣泛參與了三疣梭子蟹攻擊行為的分子機(jī)制，在繼左旋多巴和多巴胺受體激動劑后推入臨床治療波動癥的較新一類藥物開發(fā)上顯示出較好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種三疣梭子蟹COMT基因及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)是最具經(jīng)濟(jì)重要性的海蟹之一，它廣泛分布于中國沿海地區(qū)。隨著人工養(yǎng)殖技術(shù)的發(fā)展，三疣梭子蟹養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，然而，與其他甲殼類動物一樣，三疣梭子蟹非常具有侵略性，并且表現(xiàn)出強(qiáng)大的地域性和同類相食性。大量三疣梭子蟹在培育和繁殖過程中因相互之間的爭斗與應(yīng)激行為造成的個(gè)體傷亡或受到損害，導(dǎo)致三疣梭子蟹在養(yǎng)殖過程中的成活率低，產(chǎn)量低。對爭斗行為在神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)遞質(zhì)會影響水生動物的爭斗行為，特別是單胺類遞質(zhì)如5-羥色胺、章魚胺和多巴胺，其中5-羥色胺為重要的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，與爭斗性行為關(guān)系緊密。同樣重要的胺類神經(jīng)遞質(zhì)如兒茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶(Catechol-O-methyltransferase，簡稱COMT)，是1958年首先在人體發(fā)現(xiàn)的一種轉(zhuǎn)甲基酶，主要代謝兒茶酚型的化合物，COMT酶在有二價(jià)鎂離子Mg²⁺存在時(shí)，催化S腺苷蛋氨酸(SAM)的一個(gè)甲基轉(zhuǎn)移到底物DHBAc分子的一個(gè)羥基上，形成甲基化產(chǎn)物香草酸(VA)和異香草酸(IVA)的反應(yīng)機(jī)理。如一申請?zhí)枮?01310591259.3的中國發(fā)明專利申請《中國對蝦COMT重組蛋白的生產(chǎn)方法及其應(yīng)用》(公開號為CN103602642A)里公開其克隆出了中國對蝦的COMT基因，公開了該基因編碼蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列，同時(shí)，還重新設(shè)計(jì)了中國對蝦COMT重組蛋白的生產(chǎn)方法，其直接用酵母液純化，省去了原核菌體回收、破碎的繁瑣步驟，提高了純化效率，但并未對中國對蝦的爭斗行為作相應(yīng)的研究，同時(shí)，基于先前的研究已經(jīng)證實(shí)攻擊性行為主要受甲殼動物神經(jīng)系統(tǒng)中生物胺的調(diào)節(jié)。在甲殼類動物中，DA是一種廣泛分布的生物胺神經(jīng)遞質(zhì)，它調(diào)節(jié)許多生理功能。COMT是DA的主要代謝酶，它通過控制突觸中DA的代謝來影響運(yùn)動，情感和認(rèn)知行為，其活動與侵略密切相關(guān)。DA的釋放被認(rèn)為是可以引發(fā)神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)，促進(jìn)或抑制甲殼動物生理過程，但很少有研究確定甲殼動物攻擊行為的攻擊相關(guān)基因和分子調(diào)控機(jī)制，尤其是COMT基因在攻擊行為期間參與生物胺代謝的機(jī)制，包括DA，為此有必要對三疣梭子蟹相互之間的爭斗與應(yīng)激行為作進(jìn)一步的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種三疣梭子蟹的COMT基因。

本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種三疣梭子蟹的COMT基因的應(yīng)用。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：該三疣梭子蟹COMT基因，其特征在于：所述三疣梭子蟹COMT基因的序列如SEQ NO.1所示。

所述的三疣梭子蟹COMT基因的氨基酸序列為：