[發(fā)明專利]一種三疣梭子蟹COMT基因及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810491438.2
• 申請(qǐng)日: 2018-05-21
• 公開（公告）號(hào): CN108642069B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉磊;朱芳;付媛媛;王春琳;母昌考;李榮華;宋微微;史策;葉央芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/54
• 分類號(hào): C12N15/54;C12N15/70;C12N9/10
• 代理公司: 寧波誠(chéng)源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 張一平;葉桂萍

本發(fā)明涉及一種三疣梭子蟹COMT基因及應(yīng)用，涉及三疣梭子蟹基因工程，該三疣梭子蟹COMT基因基因序列如SEQ NO.1所示，本發(fā)明還提供一種制備三疣梭子蟹三疣梭子蟹COMT基因重組蛋白的方法，其特征在于包括以下步驟：(1)構(gòu)建三疣梭子蟹COMT基因重組表達(dá)載體；(2)將步驟(1)所得重組表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞，并將宿主細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，獲得表達(dá)產(chǎn)物；(3)將分離純化步驟(2)所得的表達(dá)產(chǎn)物，獲得重組蛋白；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：三疣梭子蟹COMT基因可能廣泛參與了三疣梭子蟹攻擊行為的分子機(jī)制，在繼左旋多巴和多巴胺受體激動(dòng)劑后推入臨床治療波動(dòng)癥的較新一類藥物開發(fā)上顯示出較好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種三疣梭子蟹COMT基因及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)是最具經(jīng)濟(jì)重要性的海蟹之一，它廣泛分布于中國(guó)沿海地區(qū)。隨著人工養(yǎng)殖技術(shù)的發(fā)展，三疣梭子蟹養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，然而，與其他甲殼類動(dòng)物一樣，三疣梭子蟹非常具有侵略性，并且表現(xiàn)出強(qiáng)大的地域性和同類相食性。大量三疣梭子蟹在培育和繁殖過(guò)程中因相互之間的爭(zhēng)斗與應(yīng)激行為造成的個(gè)體傷亡或受到損害，導(dǎo)致三疣梭子蟹在養(yǎng)殖過(guò)程中的成活率低，產(chǎn)量低。對(duì)爭(zhēng)斗行為在神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)遞質(zhì)會(huì)影響水生動(dòng)物的爭(zhēng)斗行為，特別是單胺類遞質(zhì)如5-羥色胺、章魚胺和多巴胺，其中5-羥色胺為重要的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，與爭(zhēng)斗性行為關(guān)系緊密。同樣重要的胺類神經(jīng)遞質(zhì)如兒茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶(Catechol-O-methyltransferase，簡(jiǎn)稱COMT)，是1958年首先在人體發(fā)現(xiàn)的一種轉(zhuǎn)甲基酶，主要代謝兒茶酚型的化合物，COMT酶在有二價(jià)鎂離子Mg²⁺存在時(shí)，催化S腺苷蛋氨酸(SAM)的一個(gè)甲基轉(zhuǎn)移到底物DHBAc分子的一個(gè)羥基上，形成甲基化產(chǎn)物香草酸(VA)和異香草酸(IVA)的反應(yīng)機(jī)理。如一申請(qǐng)?zhí)枮?01310591259.3的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《中國(guó)對(duì)蝦COMT重組蛋白的生產(chǎn)方法及其應(yīng)用》(公開號(hào)為CN103602642A)里公開其克隆出了中國(guó)對(duì)蝦的COMT基因，公開了該基因編碼蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列，同時(shí)，還重新設(shè)計(jì)了中國(guó)對(duì)蝦COMT重組蛋白的生產(chǎn)方法，其直接用酵母液純化，省去了原核菌體回收、破碎的繁瑣步驟，提高了純化效率，但并未對(duì)中國(guó)對(duì)蝦的爭(zhēng)斗行為作相應(yīng)的研究，同時(shí)，基于先前的研究已經(jīng)證實(shí)攻擊性行為主要受甲殼動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中生物胺的調(diào)節(jié)。在甲殼類動(dòng)物中，DA是一種廣泛分布的生物胺神經(jīng)遞質(zhì)，它調(diào)節(jié)許多生理功能。COMT是DA的主要代謝酶，它通過(guò)控制突觸中DA的代謝來(lái)影響運(yùn)動(dòng)，情感和認(rèn)知行為，其活動(dòng)與侵略密切相關(guān)。DA的釋放被認(rèn)為是可以引發(fā)神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)，促進(jìn)或抑制甲殼動(dòng)物生理過(guò)程，但很少有研究確定甲殼動(dòng)物攻擊行為的攻擊相關(guān)基因和分子調(diào)控機(jī)制，尤其是COMT基因在攻擊行為期間參與生物胺代謝的機(jī)制，包括DA，為此有必要對(duì)三疣梭子蟹相互之間的爭(zhēng)斗與應(yīng)激行為作進(jìn)一步的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種三疣梭子蟹的COMT基因。

本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種三疣梭子蟹的COMT基因的應(yīng)用。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為：該三疣梭子蟹COMT基因，其特征在于：所述三疣梭子蟹COMT基因的序列如SEQ NO.1所示。

所述的三疣梭子蟹COMT基因的氨基酸序列為：