[發明專利]一種不完全抗體檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201810485195.1
• 申請日: 2018-05-21
• 公開（公告）號: CN108680756A
• 公開（公告）日: 2018-10-19
• 發明（設計）人: 陳曄洲;王紅梅;李勇;段生寶;丁少華;魏雙施;蒙青林
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/80
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本發明公開了一種不完全抗體檢測試劑盒，包括：U型微孔板：其上已包被抗人球蛋白；水性膠層析介質：用于孵育血清或血漿與顆粒性抗原的混合物；顆粒性抗原：與血清或血漿中的不完全抗體反應形成抗原?抗體復合物。本發明還涉及一種不完全抗體檢測方法，通過離心或磁力分離顆粒性抗原?抗體復合物和游離抗體，代替傳統方法中繁瑣的洗滌過程。觀察結果時，如果顆粒性抗原上致敏了不完全抗體，則被抗人球蛋白捕獲，平鋪在U型微孔板底部，呈陽性；如果沒有被致敏，則不能被捕獲，聚集在底部形成一個小點，呈陰性；介于兩者之間的為弱陽性。該方法極大地簡化了操作步驟，提高了檢測效率，結果易于判讀，并且可以同時對大量樣本進行檢測，易于自動化。

技術領域

本發明涉及醫學檢測領域，尤其是涉及一種不完全抗體檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

不完全抗體是指在鹽水介質中雖能與相應的抗原顆粒結合(致敏)，但不能出現肉眼可見的凝集反應的抗體。不完全抗體主要為IgG 類抗體，與紅細胞相應抗原結合后(即致敏紅細胞)，必須通過特殊的方法，如抗人球蛋白法、聚凝胺法、酶法，才能使致敏紅細胞發生凝集反應，從而檢出此類抗體。

不完全抗體是造成臨床常見遲發性輸血反應的主要原因。如果受血者體內存在臨床有意義的抗體，就會破壞輸入的含有相應抗原的紅細胞，發生溶血性輸血反應，輕者影響紅細胞輸注的療效，重者危及患者生命。如果孕婦體內含有與胎兒紅細胞反應的不完全抗體，則會引起新生兒溶血病，產生核黃疸等嚴重影響新生兒發育的綜合征，甚至引起新生兒死亡。因此，在臨床常規的抗體篩檢、鑒定以及交叉配血中，要求對具有輸血史、妊娠史及輸用過血液制品的受血者和供血者都應進行不完全抗體檢測。臨床上保障安全輸血，診斷新生兒溶血病、自身免疫性溶血病、藥物免疫溶血性疾病等以及血型學研究工作中，對不完全抗體的檢測是最重要內容之一。

傳統的試管抗人球蛋白試驗于1945年被發明，將血清與紅細胞混合后并未出現肉眼可見的凝集反應，而當加入抗人球蛋白(二抗) 后，該二抗與致敏紅細胞上不完全抗體的Fc段結合，得以搭橋出現凝集反應，即經典的Coombs test。但是，由于試管Coombs test需要用生理鹽水離心洗滌至少三次，以避免抗人球被血清中的其他游離免疫球蛋白中和而出現假陰性反應，洗滌過程繁瑣且耗時，對操作人員的技術要求較高，所以它不能作為臨床輸血的常規檢測項目，而只是作為確證試驗。此后又發展出了一些增強介質，如聚凝胺、聚乙二醇、低離子強度溶液以及酶液等，利用這些介質的技術都可以減少或避免洗滌程序，減少孵育時間，并增強抗原抗體反應，但因為仍存在各種缺點，使其應用受到限制。

90年代發展起來的微柱凝膠試驗和固相紅細胞吸附試驗同樣都用于不完全抗體檢測。微柱凝膠試驗克服了傳統試管法的繁瑣洗滌過程，也省去了確認陰性結果是否正確的步驟，具有敏感性高、結果易判讀、能較長時間保存、樣本用量少等優點。憑借這些優勢，微柱凝膠試驗被廣泛應用于血型血清學臨床常規檢驗工作中。但是，當樣本中纖維蛋白原含量過高或者白細胞顯著增多時，會阻礙紅細胞在凝膠中的沉降而呈假陽性。陳舊的紅細胞標本中的細胞碎片也會浮于膠中或膠面上呈假陽性。當溫度較低時，凝膠顆粒的活動性減少，紅細胞較難穿過凝膠，也易出現假陽性結果。此外，原材料凝膠顆粒多為進口，受國外市場的壟斷，近年來價格越來越高，間接導致臨床檢測成本的提高。上述諸多不利因素限制了微柱凝膠試驗在臨床的進一步廣泛應用。而固相紅細胞吸附試驗中的指示細胞效期較短是影響其臨床廣泛應用的關鍵因素。

在抗體檢測技術發展過程中，從凝集試驗到現在的各種免疫標記技術，如檢測顆粒性抗原的ELISA、免疫熒光、流式細胞術等，都沒有脫離洗滌過程。洗滌過程操作繁瑣費時，在臨床應用時受到一定限制。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種操作簡單、指示細胞期效長、不易受樣本因素干擾的不完全抗體檢測試劑盒及檢測方法。

本發明的目的采用以下技術方案實現：