[發(fā)明專利]拉曼光譜編碼的液相生物芯片的檢測(cè)方法及裝置

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810481491.4
• 申請(qǐng)日: 2018-05-18
• 公開（公告）號(hào): CN108896526A
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何永紅;謝魯源;陳雪靜;王蓓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 清華大學(xué)深圳研究生院
• 主分類號(hào): G01N21/65
• 分類號(hào): G01N21/65
• 代理公司: 深圳新創(chuàng)友知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44223
• 代理人: 江耀純

本發(fā)明公開了一種拉曼光譜編碼的液相生物芯片的檢測(cè)方法及裝置，所述檢測(cè)方法步驟如下：載體與熒光探針分子反應(yīng)后，與納米金屬顆粒進(jìn)行連接，得到具有拉曼增強(qiáng)效果的表面增強(qiáng)拉曼載體，隨后與拉曼待測(cè)分子的混合物反應(yīng)制備拉曼光譜編碼的液相生物芯片，通過拉曼光譜對(duì)所述液相生物芯片的定性分析，得到所述拉曼待測(cè)分子種類的檢測(cè)結(jié)果，通過熒光顯微成像對(duì)所述液相生物芯片進(jìn)行定量分析，得到所述拉曼待測(cè)分子數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果。該發(fā)明具備已有基于熒光編碼微球的液相生物芯片的檢測(cè)方法優(yōu)點(diǎn)，而且從根本上就消除了已有液相生物芯片的解碼準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性差的問題，在生物分子分析和臨床疾病診斷等領(lǐng)域中具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子檢測(cè)領(lǐng)域，主要是涉及一種液相生物芯片的檢測(cè)方法以及裝置。

背景技術(shù)

液相生物芯片技術(shù)是一種集熒光編碼微球、流式細(xì)胞術(shù)、激光檢測(cè)和高速數(shù)字信號(hào)處理等多項(xiàng)技術(shù)為一體的新型生物分子高通量技術(shù)，它主要是以不同種類的熒光編碼微球作為載體進(jìn)行雜交反應(yīng)和信號(hào)檢測(cè)，通常多以多色流式細(xì)胞儀作為解碼和檢測(cè)平臺(tái)，通過把芯片技術(shù)和流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)結(jié)合到一起，在液相反應(yīng)體系中實(shí)現(xiàn)核酸、蛋白質(zhì)等多種生物分子的檢測(cè)。液相芯片技術(shù)解決了固態(tài)微陣列芯片反應(yīng)速率慢、重復(fù)性及靈活性差等問題，和其他傳統(tǒng)的免疫檢測(cè)方法相比，液相生物芯片技術(shù)具有高通量、多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)、高敏感性、高特異性、線性范圍寬、反應(yīng)快速、重復(fù)性好以及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

目前已知的商用主流液相生物芯片技術(shù)通過在微球表面接不同種類的有機(jī)熒光染料或在微球中包裹不同的熒光量子點(diǎn)來形成熒光編碼微球。然后在熒光編碼微球表面結(jié)合上探針分子，在液相環(huán)境中與被標(biāo)記的待測(cè)分子進(jìn)行雜交反應(yīng)。選用兩種不同波長(zhǎng)照射微球，一個(gè)波長(zhǎng)用于激發(fā)熒光編碼微球的熒光來進(jìn)行分類，做定性分析，一個(gè)波長(zhǎng)用來確定熒光編碼微球的強(qiáng)度，從而確定待測(cè)分子的數(shù)量，做定量分析。雖然通過雙色激光的同時(shí)檢測(cè)，可以確定被結(jié)合的生物分子的種類和數(shù)量，但是熒光編碼微球的液相生物芯片的

解碼準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性差。

公開于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種拉曼光譜編碼的液相生物芯片的檢測(cè)方法及裝置，從而克服熒光編碼微球的液相生物芯片解碼準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性差的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種拉曼光譜編碼的液相生物芯片的檢測(cè)方法，所述檢測(cè)方法的步驟：

I.載體與熒光探針分子反應(yīng)后，與納米金屬顆粒進(jìn)行連接，得到具有拉曼增強(qiáng)效果的表面增強(qiáng)拉曼載體，隨后與拉曼待測(cè)分子的混合物反應(yīng)制備拉曼光譜編碼的液相生物芯片，

Ⅱ.通過拉曼光譜對(duì)所述液相生物芯片的定性分析，得到所述拉曼待測(cè)分子種類的檢測(cè)結(jié)果，

Ⅲ.通過熒光顯微成像對(duì)所述液相生物芯片進(jìn)行定量分析，得到所述拉曼待測(cè)分子數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果。

優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，所述液相生物芯片是基于表面增強(qiáng)拉曼的基礎(chǔ)上、基于微米尺度的反應(yīng)載體的表面拉曼增強(qiáng)基底。

優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，所述拉曼增強(qiáng)探針分子的載體為微片。

優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，所述微片為透明固體片狀無毒材料，且在整個(gè)分子檢測(cè)過程中除在微片表面能夠修飾上探針分子以外不發(fā)生任何反應(yīng)。

優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，將陰離子聚合物修飾在所述金屬納米顆粒表面，使所述金屬納米顆粒帶上負(fù)電位，將含有大量氨基的陽(yáng)離子聚合物修飾在所述微片表面，使所述微片帶上正電位，所述金屬納米顆粒與所述微片在液相反應(yīng)環(huán)境中通過靜電作用結(jié)合，得到具有拉曼增強(qiáng)作用的基底物質(zhì)微片-金納米顆粒。

優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，不同種熒光探針分子的載體之間拉曼待測(cè)分子種類不同。