[發(fā)明專利]基于多形漢遜酵母的白樺脂酸生物合成途徑篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810475142.1
• 申請(qǐng)日: 2018-05-17
• 公開（公告）號(hào): CN108893494B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢衛(wèi)東;盧家興;段冉冉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/87
• 分類號(hào): C12N15/87;C12P33/00;C12R1/78
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種基于多形漢遜酵母的白樺脂酸生物合成途徑篩選方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)運(yùn)用低能離子注入介導(dǎo)白樺樹基因組DNA轉(zhuǎn)化多形漢遜酵母出發(fā)菌株；

2)將經(jīng)過(guò)步驟1)處理后的出發(fā)菌株涂布于YPD固體培養(yǎng)基，挑取經(jīng)YPD固體培養(yǎng)基培養(yǎng)所得的菌落于YPD液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵后離心提取發(fā)酵液，采用薄層層析對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行白樺脂酸定性分析；所述薄層層析采用的展開劑為石油醚-苯-乙酸乙脂-冰醋酸混合物，石油醚∶苯∶乙酸乙脂∶冰醋酸的體積比為10∶20∶6∶0.5；

3)挑取發(fā)酵液中存在白樺脂酸的對(duì)應(yīng)菌落于YPD液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，利用高效液相色譜對(duì)發(fā)酵所得發(fā)酵液進(jìn)行白樺脂酸定量分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基于多形漢遜酵母的白樺脂酸生物合成途徑篩選方法，其特征在于：所述出發(fā)菌株為多形漢遜酵母(H.polymorpha)DL-1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基于多形漢遜酵母的白樺脂酸生物合成途徑篩選方法，其特征在于：所述低能離子注入的條件為：注入離子為N⁺，注入劑量為1.5×10¹⁶～2.5×10¹⁶ions/cm²，注入能量為15～25KeV，脈沖時(shí)間為5～10s，間隔時(shí)間為5～10s，真空度為1.5～2.0×10^-3Pa。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基于多形漢遜酵母的白樺脂酸生物合成途徑篩選方法，其特征在于：所述步驟2)及步驟3)中，發(fā)酵包括以下步驟：于37℃、轉(zhuǎn)速為110r/min條件下培養(yǎng)60～96h。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種基于多形漢遜酵母的白樺脂酸生物合成途徑篩選方法，其特征在于：所述發(fā)酵的過(guò)程中流加0.5％的葡萄糖水溶液，流速為12.5mL/h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種基于多形漢遜酵母的白樺脂酸生物合成途徑篩選方法，其特征在于：所述高效液相色譜的上樣樣品制備方法為：將發(fā)酵液濃縮后利用甲醇進(jìn)行萃取，將萃取液用濾膜過(guò)濾。