[發明專利]一種抗菌融合肽及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810474977.5
• 申請日: 2018-05-17
• 公開（公告）號: CN108610428B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 呂名秀;盧奎;買文鵬;劉廣斌;王夢偉;彭露
• 申請（專利權）人: 河南工程學院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/20;A61K38/08;A61K47/64;A61P31/04;A61P35/00
• 代理公司: 鄭州豫開專利代理事務所(普通合伙) 41131
• 代理人: 王金

本發明公開了一種提供了一種抗菌融合肽，其肽鏈序列為：SISLLYGRKKRRQRRR。本發明還提供了另一種抗菌融合肽，其肽鏈序列為：YGRKKRRQRRRSISLL。本發明提供了上述抗菌融合肽的制備方法，根據目標抗菌融合肽的序列，從碳端到氮端將相應的氨基酸進行偶合；氮端氨基酸偶合完成后，脫保護基團洗滌吹干；切割后抽濾，使用冰乙醚充分洗滌和離心棄去上清液三次以上；干燥后的固體粉末用去離子水溶解后，分離純化，收集主峰流出液，冷凍干燥后得目標抗菌融合肽。本發明還公開了抗菌融合肽在藥品中的應用。本發明在抗癌肽的基礎上得到了具有抗菌效果的融合肽，且抗菌融合肽的抗菌效果接近了強力抗菌藥卡那霉素的抗菌作用，為進一步具體研發具有抗癌抗菌雙重作用的藥物提供了基礎。

技術領域

本發明涉及抗菌藥技術領域，尤其涉及一種抗菌融合肽。

背景技術

現有的抗菌肽的來源有三種，天然物中提取、化學方法合成和生物方法合成。

關于化學方法合成：

氨基酸是兩性物質，分子中一般含有氨基(-NH₂)和羧基(-COOH)，是抗菌肽化學合成的基本原料。研究者通常將不參加縮合反應的氨基(-NH₂)、羧基(-COOH)以及帶有活潑基團的側鏈保護起來，待到所有氨基酸都按照抗菌肽序列偶合完成之后，再進行脫保護反應。

癌癥是由于機體異常細胞的過度繁殖增生，從而損害健康、危及生命的疾病?？拱┧幬锞哂幸种瓢┘毎鲩L的作用，但抗癌藥物通常不能夠抑制細菌增長，即不具備抗菌活性。

癌癥患者通常身體比正常人虛弱，更容易受到細菌感染。目前的醫療實踐當中，對于受到細菌感染的癌癥患者（或者有受到細菌感染可能的患者），在使用抗癌藥物的同時，需要另外使用抗菌藥物。藥物的增多對于患者的健康具有負面的影響，如果能夠研發出具有抗菌作用的抗癌藥，則有望減少患者的用藥量，減少用藥對于患者健康的負面影響。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于乳腺癌抑制肽BRCA1(782-786，SISLL)的抗菌融合肽。

為實現上述目的，本發明的抗菌融合肽為TAT（47-57）氮端連接BRCA1(782-786)的SISLL-TAT，其肽鏈序列為：SISLLYGRKKRRQRRR。

本發明的目的還在于提供另一種基于乳腺癌抑制肽的抗菌融合肽。

為實現上述目的，本發明的抗菌融合肽的肽序為TAT（47-57）碳端連接BRCA1(782-786)的TAT –SISLL，其肽鏈序列為：YGRKKRRQRRRSISLL。

本發明的目的還在于提供一種上述抗菌融合肽的制備方法，依次按以下步驟進行：

以Wang樹脂為載體，Fmoc為氨基酸側鏈保護基團，哌啶的DMF溶液為脫保護試劑，HBTU、HOBT和DIEA為氨基酸縮合劑，根據目標抗菌融合肽的序列，從碳（C-）端到氮（N-）端將相應的氨基酸進行偶合；直到氮端氨基酸偶合完成后，脫除氮端氨基酸的Fmoc保護基團，洗滌后吹干；然后加入由三氟乙酸、苯甲硫醚、乙二硫醇、水和苯酚配制而成的切割試劑，切割后抽濾，將濾液收集至冰乙醚中，-20℃下靜置20 小時，使沉淀物完全生成；離心棄去上清液；對沉淀物使用冰乙醚充分洗滌和離心棄去上清液三次以上；剩下的沉淀物經干燥，所得固體粉末進一步用去離子水溶解后，通過反相高效液相色譜（即RP-HPLC）分離純化，收集主峰流出液，并冷凍干燥后獲得相應的目標抗菌融合肽。

所述反相高效液相色譜對抗菌融合肽的分離純化的條件如下：