[發(fā)明專利]一種用于木薯固氮的微桿菌的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810470428.0 | 申請日： | 2016-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN108587977A | 公開（公告）日： | 2018-09-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 何冰;張曉;顧明華;溫榮輝 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京君泊知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11496 | 代理人： | 王程遠 |
| 地址： | 530004 廣西*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 木薯 保藏 生物菌劑 微桿菌 固氮 制備 中國微生物菌種 液體發(fā)酵培養(yǎng) 微生物中心 微桿菌屬 含氮量 幼苗根 氮素 菌種 應(yīng)用 生長 積累 管理 生產(chǎn) | ||
1.一種用于木薯固氮的微桿菌的制備方法，其特征在于，所述一種用于木薯固氮的微桿菌為厚壁菌門Firmicutes；微桿菌屬Microbacterium sp.，保藏編號為：CGMCCNo.12182，步驟為：
步驟一、樣品選取：對木薯進行采樣，選取木薯的根部未膨大的部分，選取一定長度的完整根部，直徑為2-3mm；
步驟二、將采集的木薯根部按照根長分類，大致分為4類分別為5cm，10cm，15cm，20cm，用蒸餾水沖洗干凈；將分類好的木薯根進行表面殺菌，將表面殺菌完成的木薯根用無菌水沖洗5遍，將最后一遍沖洗的無菌水涂布在LB培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)36h，確定無菌水涂布的培養(yǎng)基上無菌體生長，證明根部外表面已充分滅菌干凈不存在外源菌體，再將根部材料用于內(nèi)生菌的篩選；
步驟三，將步驟二處理后消毒并沖洗干凈的根放入研缽中研磨，加入10mL的無菌水后靜置5min，取0.1mL的研磨液涂布在無氮固體培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)5-7d；觀察無氮固體培養(yǎng)基上的細菌生長狀況，選取能夠生長的并能夠挑起的單個菌落進行劃線培養(yǎng)；在無氮固體培養(yǎng)基上進行劃線培養(yǎng)，傳代三次后選取能夠傳代培養(yǎng)，并且可以劃線分離的細菌進行后續(xù)試驗；
步驟四、對所得內(nèi)生固氮菌株進行總DNA提取，并以總DNA為模板，擴增16S rRNA基因序列，擴增產(chǎn)物測序后，結(jié)果在NCBI上進行比對。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟一中，采樣選取苗期木薯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟一中，選取木薯根部的長度在5cm以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟三中，無氮固體培養(yǎng)基的組成為：蔗糖10g，K2HPO4·H2O 0.1g，MgSO4·H2O 0.2g，CaCl2·H2O 0.02g，Na2MoO4·H2O 0.002g，Malic acid 5.0g，KH2PO4·H2O 0.4g，NaCl 0.1g，F(xiàn)eCl30.01g，蒸餾水1000mL，pH7.0。
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