[發(fā)明專利]一種消化液

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810469007.6
• 申請(qǐng)日: 2018-05-16
• 公開（公告）號(hào): CN108753910A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐峰;趙宏軍;郎娟;景元明;余美文;孫愛靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江思格一醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/24
• 分類號(hào): C12Q1/24
• 代理公司: 紹興市知衡專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33277
• 代理人: 施春宜

本申請(qǐng)涉及一種消化液，屬于測(cè)試用樣品制備技術(shù)領(lǐng)域。包括以下濃度的各組分：蛋白酶K 0.1?2mg/ml，胰蛋白酶1?100mg/ml，EDTA 0.1?2mg/ml。將本申請(qǐng)應(yīng)用于腫瘤淋巴結(jié)組織標(biāo)本處理，特別是機(jī)構(gòu)固定液以及酸、堿處理過的腫瘤淋巴結(jié)根治標(biāo)本，加大脂肪組織和淋巴結(jié)軟硬度差，方便淋巴結(jié)取材，有效提高了淋巴結(jié)檢出數(shù)目和精確淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及一種消化液，屬于測(cè)試用樣品制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

現(xiàn)有腫瘤淋巴結(jié)清掃離體組織標(biāo)本通常是在福爾馬林固定液中浸泡，這主要由于甲醛可以長(zhǎng)時(shí)間并且很好的保存組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)特征，同時(shí)又具有良好的經(jīng)濟(jì)效用。此類標(biāo)本處理方法雖然可以很好的固定組織的形態(tài)，但也使含有脂肪組織的標(biāo)本變硬，在病理科取材特別是淋巴結(jié)取材時(shí)大大增加了難度。腫瘤淋巴結(jié)清掃離體組織標(biāo)本中，徹底地淋巴結(jié)取材對(duì)腫瘤診斷分期、制定治療方案及判斷預(yù)后至關(guān)重要，而常規(guī)的固定液和現(xiàn)有的標(biāo)本固定方法都無法滿足在快速固定的同時(shí)提高淋巴結(jié)的取材速度和檢出率，使得病理醫(yī)生在長(zhǎng)期的離體脂肪組織中手摸刀切式尋找淋巴結(jié)的方法存在取材不充分、操作時(shí)間長(zhǎng)等諸多弊端，并最終影響病人的治療方案、預(yù)后和轉(zhuǎn)歸。為解決現(xiàn)有腫瘤淋巴結(jié)清掃組織標(biāo)本處理技術(shù)中存在的問題，臨床實(shí)際工作中急需軟化或者溶解脂肪的同時(shí)充分暴露和固定淋巴結(jié)、保持淋巴結(jié)組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)完整的方法。

基于此，做出本申請(qǐng)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有淋巴結(jié)檢出技術(shù)所存在的上述缺陷，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N全新的固定脂肪消化液，在消化和液化脂肪的同時(shí)，加大脂肪組織和淋巴結(jié)軟硬度差，方便淋巴結(jié)取材。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本申請(qǐng)采取的技術(shù)方案如下：

一種消化液，包括以下濃度的各組分：蛋白酶K 0.1-2mg/ml，胰蛋白酶1-100mg/ml，EDTA0.1-2mg/ml。

進(jìn)一步的，作為優(yōu)選：

所述消化液中，各組分的濃度分別為：蛋白酶K 0.5mg/ml，胰蛋白酶25mg/ml，EDTA1mg/ml。

具有上述特征的消化液還可以溶解于兩種緩沖液中：

一種是PBS緩沖液，pH7.4，主要作用是緩沖和維持反應(yīng)體系的pH值及鹽離子濃度。根據(jù)需要，還可以加1-10mM CaCl₂穩(wěn)定酶活性所需雙價(jià)陽離子。

另一種是pH7.5 50mMTris-HCl緩沖液，還可加1-10mM CaCl₂，配制方法是6克的Tris-Base加水至900ml，用HCl調(diào)至pH7.5，還可以加CaCl₂至終濃度10mM。Tris主要作用是緩沖和維持反應(yīng)體系的pH值及鹽離子濃度,CaCl₂穩(wěn)定酶活性所需雙價(jià)陽離子。

上述消化液的制備方法如下：稱取EDTA粉末溶于PBS中，在配置時(shí)調(diào)整溶液pH適宜，攪拌均勻，配置形成高濃度的EDTA母液；分別稱取胰蛋白酶和蛋白酶K，溶解于緩沖溶液中后，將其按比例滴入EDTA母液，根據(jù)需要補(bǔ)充滴加PBS即可。

將上述方法應(yīng)用于腫瘤淋巴結(jié)離體標(biāo)本的固定處理，其優(yōu)點(diǎn)主要體現(xiàn)為：

(1)本申請(qǐng)所提供的消化液，是具有消化和液化脂肪等作用的混合液，用于依次經(jīng)“軟脂固定液”固定、酸和堿處理過腫瘤淋巴結(jié)根治標(biāo)本，能進(jìn)入脂肪細(xì)胞發(fā)揮消化脂肪作用，可軟化及液化經(jīng)“軟脂固定液”固定處理的標(biāo)本，而淋巴結(jié)因表面致密結(jié)締組織被膜固定保護(hù)而不受影響或影響輕微。

(2)組織標(biāo)本先上述消化液處理后，加大了脂肪組織和淋巴結(jié)之間的軟硬度差，方便淋巴結(jié)取材，提高了工作效率和工作質(zhì)量，也減少了病理科醫(yī)生的解剖取材時(shí)間，為后期病理學(xué)科的室外質(zhì)量控制提供了可能。