[發明專利]用于組氨酸標簽蛋白純化的納米二氧化硅顆粒及其制備方法

在審

• 申請號: 201810467980.4
• 申請日: 2018-05-16
• 公開（公告）號: CN110498419A
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發明（設計）人: 楊成麗;楊帆;孫立恒;穆瑤;曾巧西;李大力
• 申請（專利權）人: 南京理工大學
• 主分類號: C01B33/18
• 分類號: C01B33/18;B82Y30/00;C07K1/22
• 代理公司: 32203 南京理工大學專利中心
• 代理人: 劉海霞<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.用于組氨酸標簽蛋白純化的納米二氧化硅顆粒的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

步驟1，將納米二氧化硅顆粒超聲分散在乙醇中，加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷，常溫攪拌，離心，得到氨基化的納米二氧化硅顆粒；

步驟2，將氨基化的納米二氧化硅顆粒用磷酸鹽緩沖液洗滌除去未反應的3-氨基丙基三乙氧基硅烷，超聲分散在磷酸鹽緩沖液中，加入戊二醛溶液，常溫攪拌，反應結束后，磷酸鹽緩沖液洗滌，離心，得到醛基化的納米二氧化硅顆粒；

步驟3，醛基化的納米二氧化硅顆粒用磷酸鹽緩沖液重新懸浮，加入含亞氨基二乙酸的4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸溶液，常溫攪拌，用Tris-HCl緩沖液洗滌和重新懸浮，加入氰基硼氫化鈉溶液，常溫攪拌，離心，Tris-HCl緩沖液洗滌，得到用于組氨酸標簽蛋白純化的納米二氧化硅顆粒。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的納米二氧化硅顆粒的粒徑為10～500nm。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的含亞氨基二乙酸的4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸溶液中，亞氨基二乙酸的質量濃度為0.05％。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的氰基硼氫化鈉的濃度為1～10mM。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的常溫攪拌時間為0.5～12h。

6.根據權利要求1至5任一所述的制備方法制得的納米二氧化硅顆粒。

7.根據權利要求6所述的納米二氧化硅顆粒在組氨酸標簽蛋白純化中的應用，其特征在于，具體步驟如下：

用Tris-HCl緩沖液重新懸浮用于組氨酸標簽蛋白純化的納米二氧化硅顆粒，加入硫酸鎳溶液，常溫攪拌，水洗，用磷酸鹽緩沖液重新懸浮，將納米二氧化硅顆粒懸浮液加入到含組氨酸標簽蛋白的水溶液中，常溫振蕩混合，離心收集納米二氧化硅顆粒，用含1～25mM咪唑的磷酸鹽緩沖液洗滌，再用含0.4～1.5M咪唑的磷酸鹽緩沖液洗脫組氨酸標簽蛋白，離心去除納米二氧化硅顆粒，上清液為得到的純化的組氨酸標簽蛋白溶液。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的常溫攪拌的時間為1～30min。

9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的硫酸鎳溶液濃度為0.1～1M。

10.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的磷酸鹽緩沖液pH為7.3。