[發明專利]一種載富勒烯人工髓核配方的制備方法

有效

• 申請號: 201810457276.0
• 申請日: 2018-05-14
• 公開（公告）號: CN108498857B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 喬之光;劉永佳;孫彬彬;戴尅戎;朱邦尚;趙杰
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院
• 主分類號: A61L27/08
• 分類號: A61L27/08;A61L27/20;A61L27/24;A61L27/18;D01D5/00;D04H1/728
• 代理公司: 上海熠澗知識產權代理有限公司 31442
• 代理人: 何靜生

1.一種載富勒烯人工髓核的制備方法，其特征在于：該載富勒烯人工髓核的制備方法包括以下步驟：

S1、富勒烯/殼聚糖/Ⅱ型膠原蛋白/β-甘油磷酸鈉/羥乙基纖維素干凝膠的制備：

一、殼聚糖溶液的配制：1、材料的選取：使用50?mL的廣口燒杯進行濃度為0.1M的稀醋酸的量取以及使用天平進行一定量的脫乙酰度大于90%的殼聚糖粉末的稱取；2、材料的混合：使用磁力攪拌機對燒杯內部量取的稀醋酸進行攪拌，并且將稱取的殼聚糖粉末依次加入燒杯內部與稀醋酸進行攪拌混合，直至殼聚糖溶液的濃度為10-20?wt%后，停止攪拌混合步驟；3、材料的消毒：將混合完成后的濃度為10-20wt%的殼聚糖溶液置于高溫高壓滅菌鍋的內部進行消毒；4、材料的存儲：待消毒完成后，將殼聚糖溶液靜置冷卻，待冷卻至室溫后，將殼聚糖溶液放入冰箱內進行存儲，等待下一步驟；

二、Ⅱ型膠原溶液的配制：1、材料的選取：配制一定量濃度為0.02M的稀醋酸溶液以及量取一定量的無菌Ⅱ型膠原；2、材料的消毒：使用濾膜將配制好的稀醋酸溶液進行過濾消毒；3、材料的混合：將無菌Ⅱ型膠原依次加入配制好的稀醋酸溶液內，同時進行緩慢攪拌混合，二者溶解混合成為Ⅱ型膠原溶液，待混合后的溶液膠原濃度為2.5-5?mg/mL后，停止攪拌，其中Ⅱ型膠原溶液的配制中的1-3步驟均在超凈臺中進行；4、材料的存儲：將攪拌混合所得到的膠原濃度為2.5-5?mg/mL的Ⅱ型膠原溶液進行封口后，放置在冰箱內部進行存儲，等待下一步驟；

三、β-甘油磷酸鈉溶液的配制：1、材料的選取：取一定量的β-甘油磷酸鈉粉末，將其逐步加入到超純水中進行溶解，直至β-甘油磷酸鈉溶液的濃度為50wt%即可；2、材料的消毒：使用濾膜對溶解獲得的濃度為50?wt%的β-甘油磷酸鈉溶液進行過濾消毒；3、材料的存儲：將過濾消毒后的β-甘油磷酸鈉溶液放置于恒溫冰箱內部，進行存儲，等待下一步驟；

四、富勒烯/羥乙基纖維素溶液的配制：1、材料的選取：取適量的羥乙基纖維素、富勒烯以及PBS溶液；2、材料的混合：將羥乙基纖維素逐步加入至PBS溶液內部進行溶解混合，形成羥乙基纖維素溶液，羥乙基纖維素溶液的濃度為10-50?mg/mL；3、材料的消毒：使用濾膜對羥乙基纖維素溶液進行過濾消毒；4、材料的二次混合：將富勒烯加入至羥乙基纖維素溶液中進行二次混合；5、材料的存儲：將二次混合后獲得的富勒烯/羥乙基纖維素溶液放置在恒溫冰箱內進行存儲，等待下一步驟；

五、殼聚糖/Ⅱ型膠原溶液的配制：1、材料的混合：將步驟一中配制好的無菌殼聚糖溶液與步驟二中配制好的Ⅱ型膠原溶液按照2:1的體積比例加入無菌燒杯中，然后將燒杯置于冰上，進行攪拌混合，其中攪拌混合時長為10分鐘；2、材料的存儲：將攪拌混合后的殼聚糖/Ⅱ型膠原溶液進行封口，然后放置在冰箱內部進行存儲，等待下一步驟；

六、殼聚糖/Ⅱ型膠原溶液、β-甘油磷酸鈉溶液以及富勒烯/羥乙基纖維素溶液的混合：1、材料的混合：將步驟五中的殼聚糖/Ⅱ型膠原溶液、步驟三中的β-甘油磷酸鈉溶液以及步驟四中的富勒烯/羥乙基纖維素溶液置于超凈臺內部，其中殼聚糖/Ⅱ型膠原溶液置于冰上進行攪拌，然后將配置好的無菌β-甘油磷酸鈉溶液逐步緩慢加入至殼聚糖/Ⅱ型膠原溶液內，進行混合，獲得濃度為4-15?wt%的殼聚糖/Ⅱ型膠原/β-甘油磷酸鈉溶液，然后將富勒烯/羥乙基纖維素溶液加入至殼聚糖/Ⅱ型膠原/β-甘油磷酸鈉溶液的內部進行混合，將殼聚糖/Ⅱ型膠原/β-甘油磷酸鈉/富勒烯/羥乙基纖維素的混合溶液置于溫度為37℃的恒溫水浴鍋內，進行溶液的升溫，待混合溶液呈凝膠狀態后，置于冰箱內部進行冷凍干燥，從而獲得富勒烯/殼聚糖/Ⅱ型膠原蛋白/β-甘油磷酸鈉/羥乙基纖維素干凝膠，其中冰箱的溫度為-80℃，冷凍干燥時長為4小時;

S2、富勒烯聚氨酯靜電紡絲膜的制備：

1、材料的選取：量取適量的聚氨酯、六氟異丙醇溶劑以及富勒烯，其中富勒烯的重量為聚氨酯重量的1~10％；2、材料的混合：將聚氨酯加入至六氟異丙醇溶劑內進行溶解混合，形成重量百分比為10~20％的溶液，然后將富勒烯加入至混合溶液內，進行二次混合；3、材料的成膜：將二次混合后的富勒烯/聚氨酯/六氟異丙醇溶劑注入至靜電紡絲裝置內，進行靜電紡絲，從而獲得聚氨酯納米纖維膜，其中靜電紡絲裝置的電壓為20~30?kV、噴絲頭溶液流量為0.1~10?mL/h及接收距離為10~20?cm，其中聚氨酯納米纖維膜的纖維直徑為100~500nm；4、材料的成型：將靜電紡絲后的聚氨酯納米纖維膜進行冷凍干燥及真空干燥；其中靜電紡絲的過程：（1）溶液的注入：將富勒烯/聚氨酯/六氟異丙醇溶劑置于注射器的內部，且通過其推進器進行推動，直至液滴穩定流下后，調高推進器電壓；（2）絲膜的接收：使用滾軸進行聚氨酯納米纖維膜的接收，通過滾軸滾動進行紡絲過程中的聚氨酯納米纖維膜的持續接收，從而形成完整的聚氨酯納米纖維膜，其中滾軸為不銹鋼材質構成;

S3、載富勒烯人工髓核的制備：一、內層的處理：將S1步驟中最終獲得的富勒烯/殼聚糖/Ⅱ型膠原蛋白/β-甘油磷酸鈉/羥乙基纖維素干凝膠切成若干小塊；二、外層的處理：裁剪S2步驟制備的富勒烯聚氨酯靜電紡絲膜，將2塊富勒烯聚氨酯靜電紡絲膜呈上下2層設置，二者之間留有間隔；三、載富勒烯人工髓核的成型：將步驟一中的若干小塊的富勒烯/殼聚糖/Ⅱ型膠原蛋白/β-甘油磷酸鈉/羥乙基纖維素干凝膠放置在2層富勒烯聚氨酯靜電紡絲膜之間的間隔，并通過熱壓裝置將2層膜的邊緣處進行密封，從而形成人工髓核。