[發明專利]亞洲小車蝗乳糖酶-根皮苷水解酶LPH及其編碼基因與應用

在審

• 申請號: 201810455573.1
• 申請日: 2018-05-14
• 公開（公告）號: CN108611338A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 張澤華;崔伯陽;黃訓兵;郝昆;農向群;王廣君;涂雄兵;王峰;趙海龍;芭芭拉侯賽因張
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N9/38;C12N15/56;C12N15/85;A01K67/033
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;陳曉慶

本發明公開了亞洲小車蝗乳糖酶?根皮苷水解酶LPH及其編碼基因與應用。本發明首先從亞洲小車蝗中克隆了亞洲小車蝗乳糖酶?根皮苷水解酶基因LPH，并對亞洲小車蝗LPH基因設計引物，合成用于干擾亞洲小車蝗LPH基因的dsRNA，且運用注射法將dsRNA導入亞洲小車蝗對亞洲小車蝗乳糖酶?根皮苷水解酶基因LPH進行RNAi。結果表明：dsRNA注射亞洲小車蝗后，存活率、生長速率、體重及總體表現力均顯著降低，說明亞洲小車蝗乳糖酶?根皮苷水解酶LPH在昆蟲生長發育過程中起著重要作用。本發明為害蟲的分子調控提供了新的方法，也為深入理解昆蟲生長發育機制、創制新的生物農藥制劑提供理論基礎。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及亞洲小車蝗乳糖酶-根皮苷水解酶LPH及其編碼基因與應用。

背景技術

我國是一個農業大國，因此農業經濟是國民經濟的重要組成部分，但是受農作物病蟲害的影響，使得農作物的收獲量大大降低，農業生態環境和正常生長等受到了嚴重的影響，對于社會和諧發展和持續性發展極為不利。傳統病蟲害防治多以應急防治和化學防治為主，對病蟲害防治過分依賴化學農藥。這都表現了現階段農作物病蟲害防治存在相對滯后的弊端。病蟲害的防治是一個漫長的過程，需要在不斷的探索、改進和總結中進行，引進新的病蟲害防治技術并不代表完全拋棄傳統防治方式，只有做到新技術與傳統防治方式相結合，才能在病蟲害防治上取得新的突破。

乳糖酶-根皮苷水解酶(lactase-phlorizin hydro-lase，LPH)對乳糖起水解作用，是動物中腸組織上皮細胞微絨膜上的一種糖蛋白，具有乳糖酶(β-D-半乳糖苷酶-β-半乳糖水解酶)和根皮苷水解酶(糖基-N-神經酰胺-葡萄糖水解酶)活性，在動物對碳水化合物的消化中起重要作用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是如何防治害蟲。

為了解決上述技術問題，本發明首先提供了一種乳糖酶-根皮苷水解酶。

本發明提供的乳糖酶-根皮苷水解酶來源于亞洲小車蝗，將其命名為LPH，是如下a)或b)或c)或d)的蛋白質：

a)氨基酸序列是序列2所示的蛋白質；

b)在序列2所示的蛋白質的N端和/或C端連接標簽得到的融合蛋白質；

c)將序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白質；

d)與序列2所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白質。

為了使a)中的蛋白質便于純化，可在序列表中序列2所示的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。

表1、標簽的序列

上述c)中的蛋白質LPH，所述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

上述c)中的蛋白質LPH可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。

上述c)中的蛋白質LPH的編碼基因可通過將序列1所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5′端和/或3′端連上表1所示的標簽的編碼序列得到。

為了解決上述技術問題，本發明還提供了與LPH蛋白質相關的生物材料。

本發明提供的與LPH蛋白質相關的生物材料為下述A1)至A8)中的任一種：

A1)編碼LPH蛋白質的核酸分子；

A2)含有A1)所述核酸分子的表達盒；