[發(fā)明專利]新城疫病毒抗體檢測試劑盒

有效

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• 申請日: 2018-05-14
• 公開（公告）號: CN110488017B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發(fā)明（設計）人: 晉育丹;王文泉;呂鎖群
• 申請（專利權）人: 洛陽中科生物芯片技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田;劉磊

本發(fā)明涉及新城疫病毒抗體檢測試劑盒。本發(fā)明的檢測試劑盒包括一個或多個固體載體，以及獨立地連接于所述一個或多個固體載體上的特定多肽或多肽組合。

技術領域

本發(fā)明主要涉及禽用試劑盒及診斷方法。具體而言，本發(fā)明涉及可用于對新城疫抗體檢測的試劑盒以及檢測方法。

背景技術

新城疫(ND)是由NDV(Newcastle disease virus,新城疫病毒)引起的一種極易傳染的毀滅性疾病，其死亡率常高達100％，廣泛分布于許多國家,OIE將其列為A類疫病。本病的典型特征是呼吸道、消化道粘膜出血，人也有易感性。本病在1926年最早發(fā)現(xiàn)于印度尼西亞的巴塔維亞，同年發(fā)現(xiàn)于英國新城，因此而得名。

NDV為副黏病毒科副黏病毒屬(Avulavirus)的禽副黏病毒I型(APMV-1)。該病毒具有囊膜結構，基因組為單股負鏈不分節(jié)段的RNA病毒，由6種結構蛋白組成，分別為NP、P、M、F、HN和L蛋白。NP蛋白為核衣殼蛋白，氨基酸保守性較高，大部分NDV病毒在NP蛋白443-460位置都具有一高度保守的B細胞表位；P蛋白是病毒RNA合成的必需因子；M、F和HN蛋白與病毒囊膜的形成相關；F蛋白(融合蛋白)和HN蛋白(血凝素神經(jīng)氨酸酶蛋白)是病毒的主要免疫原性蛋白，可以誘導機體產(chǎn)生中和抗體。F蛋白介導病毒與宿主細胞的膜融合，其蛋白裂解位點與病毒毒力有關。HN蛋白具有神經(jīng)氨酸酶及促進融合等作用；此外，該蛋白還與病毒毒力相關。L蛋白為病毒最大的蛋白，它在NDV6種結構蛋白中最為保守，具有RNA聚合酶、轉錄后修飾等生物學活性，可與NP和P蛋白共同構成病毒復制復合體，該復合體參與病毒基因組的轉錄和復制。

目前，新城疫的實驗室檢測技術主要包括：常規(guī)分離鑒定，血清學方法(血凝試驗(HA)、血凝抑制試驗(HI)、瓊脂擴散實驗(AGP)、熒光抗體技術(FA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、病毒中和試驗(VNT)、乳膠凝集試驗(LAT)、神經(jīng)氨酸酶試驗(NIT)、放射免疫試驗(RIA)，分子生物學方法(RNA指紋圖譜、核酸探針技術、RT-PCR技術)等。這其中，酶聯(lián)免疫測定的特異性和敏感性較高且適合檢測大量樣品，因此，被廣泛應用于新城疫病毒抗體的檢測。

用于新城疫病毒抗體檢測的酶聯(lián)免疫測定方法主要包括競爭酶聯(lián)免疫測定(c-ELISA)、阻斷酶聯(lián)免疫測定(b-ELISA)和間接阻斷酶聯(lián)免疫測定。c-ELISA和b-ELISA的特異性和敏感性都比較高，是被臨床普遍接受的新城疫病毒抗體檢測方法。但是，c-ELISA和b-ELISA均需使用單克隆抗體，這造成檢測成本大幅提高；而且，c-ELISA和b-ELISA的操作繁瑣、檢測時間長、判據(jù)復雜。另一方面，傳統(tǒng)的間接ELISA使用源自新城疫病毒的完整蛋白或重組蛋白作為包被抗原來檢測血清中的抗體，其成本低于c-ELISA和b-ELISA；但是，由于該方法使用完整蛋白作為抗原，容易發(fā)生抗體的錯誤識別和非特異性識別，因此，其特異性和敏感性都不及c-ELISA和b-ELISA。

因此，需要開發(fā)出檢測成本低、檢測時間短、操作簡便、特異性和敏感性高的新城疫病毒抗體檢測試劑盒。

發(fā)明內容

鑒于上述現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測成本低、檢測時間短、操作簡便、特異性和敏感性高的新城疫病毒抗體檢測試劑盒，以及能夠用于制備該試劑盒的多肽或多肽組合。

發(fā)明人為解決上述技術問題進行了深入研究，結果發(fā)現(xiàn)，當用SEQ ID NO：1～5所示的多肽組合檢測新城疫病毒抗體時，敏感性為88％、特異性為96％，完全可以與c-ELISA方法和b-ELISA方法媲美。

因此，本發(fā)明包括：

1.一種新城疫病毒抗體(IgY)檢測試劑盒，其包括一個或多個固體載體，以及獨立地連接于所述一個或多個固體載體上的下述多肽組合1；

多肽組合1

SEQ ID NO：1所示的多肽，

SEQ ID NO：2所示的多肽，