[發明專利]紫花玉簪內生真菌代謝產物、醫用生物活性及其應用

在審

• 申請號: 201810454507.2
• 申請日: 2018-05-14
• 公開（公告）號: CN108635490A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 梁曉霞;胡云鍇;欒尚賢;吳強;陳楠;殷中瓊;賀常亮;呂程;張偉;袁志祥
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A61K36/896
• 分類號: A61K36/896;A61K36/06;A61P31/10;A61P17/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及兩株紫花玉簪內生真菌（HoV3、HoV7）的分離培養方法及其代謝產物對動物真菌性皮膚病抑制作用。該真菌分離自紫花玉簪，其代謝產物對犬小孢子菌(Sabouraudites lanosus)、石膏樣小孢子菌(Microsporum gypseum)、須癬毛癬菌(Trichophyton mentagrophytes)3種動物病原菌具有良好抑菌活性。

技術領域

本發明屬微生物技術領域，具體涉及內生真菌代謝產物在制備抗真菌藥物的應用。

背景技術

紫花玉簪（Hosta ventricosa）屬百合科（Liliacea）玉簪屬（Hosta）多年生宿根草本植物，主要分布于海拔500～2400 m的亞洲溫帶，亞熱帶地區，原產于中國，韓國和日本。其全草均可入藥，是一種蒙醫藥學傳統常用藥材，其中玉簪花主治疔瘡，蛇蟲傷等，玉簪葉主治咽喉疼痛，小便不適，燒傷等，玉簪根消除腫痛、解除毒素等。

據報道，玉簪花和根的提取物對供試動物病原菌有抑制作用。但直接從植物中提取抗菌劑成本高，植物內生真菌所產生代謝產物可以打破直接利用植物時存在的一些弊端，包括植物本身生長周期較長、產量有限、不能循環利用等限制。申請者根據宿主植物與其內微生物在長期共同生活而具有產生相同活相似次生代謝產物合成途徑的“內共生理論”，從紫花玉簪中分離篩選到對2種對動物病原菌具有較好的抑菌活性的內生真菌，相關研究未見報道。

發明內容

本發明的目的是從紫花玉簪中分離篩選出有抑菌活性的內生真菌代謝產物，并將該代謝產物應用于治療皮膚病害。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種具有抗真菌活性的紫花玉簪內生真菌發酵液提取物，其特征在于所述內生真菌發酵液提取物選自石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物之一，或其任意組合。

所述提取物是通過以下方法制備得到：（1）采集新鮮健康的紫花玉簪根部；

（2）將步驟（1）紫花玉簪根部組織表面消毒后，做超凈工作臺潔凈度檢查，漂洗液檢查，植物組織印記法篩選無菌組織塊；

（3）將步驟（2）的無菌組織于無菌工作臺切成小塊，置于PDA培養基中，于恒溫真菌培養箱中倒置培養，待出現內生真菌菌絲沿組織切口向外生長時，采用尖端菌絲挑取法，挑取形態不同的菌落，經反復純化后轉接到PDA斜面培養基，即得紫花玉簪內生真菌；

（4）將新鮮馬鈴薯洗凈去皮后切成小塊，加蒸餾水煮沸，用紗布過濾，濾液中加入葡萄糖攪拌均勻，用蒸餾水稀釋，分裝、滅菌，制得液體發酵培養基；

（5）將步驟（4）液體發酵培養基分裝在錐形瓶中，用打孔器將經步驟（3）分離純化的內生真菌打成菌餅于錐形瓶中，進行培養，并將所培養得發酵液進行離心，取上清液，經微孔濾膜過濾，即得內生菌發酵液；

（6）取步驟（5）獲得的內生菌發酵液，冷凍干燥后，用蒸餾水分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進行萃取，合并相同溶劑的萃取液，萃取液真空濃縮干燥，分別得到石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物。

一種藥物組合物，其包括所述的內生真菌發酵液提取物以及藥學上可接受的載體。

所述內生真菌發酵液提取物或所述藥物組合物在制備抗真菌或防治真菌感染藥物中的應用。

所述內生真菌發酵液提取物或所述藥物組合物在制備防治皮膚病害藥物中的應用。

所述內生真菌選自HoV3、HoV7或其組合。