[發(fā)明專(zhuān)利]紫花玉簪內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物、醫(yī)用生物活性及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810454507.2
• 申請(qǐng)日: 2018-05-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108635490A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁曉霞;胡云鍇;欒尚賢;吳強(qiáng);陳楠;殷中瓊;賀常亮;呂程;張偉;袁志祥
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K36/896
• 分類(lèi)號(hào): A61K36/896;A61K36/06;A61P31/10;A61P17/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明涉及兩株紫花玉簪內(nèi)生真菌（HoV3、HoV7）的分離培養(yǎng)方法及其代謝產(chǎn)物對(duì)動(dòng)物真菌性皮膚病抑制作用。該真菌分離自紫花玉簪，其代謝產(chǎn)物對(duì)犬小孢子菌(Sabouraudites lanosus)、石膏樣小孢子菌(Microsporum gypseum)、須癬毛癬菌(Trichophyton mentagrophytes)3種動(dòng)物病原菌具有良好抑菌活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物在制備抗真菌藥物的應(yīng)用。

背景技術(shù)

紫花玉簪（Hosta ventricosa）屬百合科（Liliacea）玉簪屬（Hosta）多年生宿根草本植物，主要分布于海拔500～2400 m的亞洲溫帶，亞熱帶地區(qū)，原產(chǎn)于中國(guó)，韓國(guó)和日本。其全草均可入藥，是一種蒙醫(yī)藥學(xué)傳統(tǒng)常用藥材，其中玉簪花主治疔瘡，蛇蟲(chóng)傷等，玉簪葉主治咽喉疼痛，小便不適，燒傷等，玉簪根消除腫痛、解除毒素等。

據(jù)報(bào)道，玉簪花和根的提取物對(duì)供試動(dòng)物病原菌有抑制作用。但直接從植物中提取抗菌劑成本高，植物內(nèi)生真菌所產(chǎn)生代謝產(chǎn)物可以打破直接利用植物時(shí)存在的一些弊端，包括植物本身生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)、產(chǎn)量有限、不能循環(huán)利用等限制。申請(qǐng)者根據(jù)宿主植物與其內(nèi)微生物在長(zhǎng)期共同生活而具有產(chǎn)生相同活相似次生代謝產(chǎn)物合成途徑的“內(nèi)共生理論”，從紫花玉簪中分離篩選到對(duì)2種對(duì)動(dòng)物病原菌具有較好的抑菌活性的內(nèi)生真菌，相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是從紫花玉簪中分離篩選出有抑菌活性的內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物，并將該代謝產(chǎn)物應(yīng)用于治療皮膚病害。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種具有抗真菌活性的紫花玉簪內(nèi)生真菌發(fā)酵液提取物，其特征在于所述內(nèi)生真菌發(fā)酵液提取物選自石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物之一，或其任意組合。

所述提取物是通過(guò)以下方法制備得到：（1）采集新鮮健康的紫花玉簪根部；

（2）將步驟（1）紫花玉簪根部組織表面消毒后，做超凈工作臺(tái)潔凈度檢查，漂洗液檢查，植物組織印記法篩選無(wú)菌組織塊；

（3）將步驟（2）的無(wú)菌組織于無(wú)菌工作臺(tái)切成小塊，置于PDA培養(yǎng)基中，于恒溫真菌培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，待出現(xiàn)內(nèi)生真菌菌絲沿組織切口向外生長(zhǎng)時(shí)，采用尖端菌絲挑取法，挑取形態(tài)不同的菌落，經(jīng)反復(fù)純化后轉(zhuǎn)接到PDA斜面培養(yǎng)基，即得紫花玉簪內(nèi)生真菌；

（4）將新鮮馬鈴薯洗凈去皮后切成小塊，加蒸餾水煮沸，用紗布過(guò)濾，濾液中加入葡萄糖攪拌均勻，用蒸餾水稀釋?zhuān)盅b、滅菌，制得液體發(fā)酵培養(yǎng)基；

（5）將步驟（4）液體發(fā)酵培養(yǎng)基分裝在錐形瓶中，用打孔器將經(jīng)步驟（3）分離純化的內(nèi)生真菌打成菌餅于錐形瓶中，進(jìn)行培養(yǎng)，并將所培養(yǎng)得發(fā)酵液進(jìn)行離心，取上清液，經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，即得內(nèi)生菌發(fā)酵液；

（6）取步驟（5）獲得的內(nèi)生菌發(fā)酵液，冷凍干燥后，用蒸餾水分散，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，合并相同溶劑的萃取液，萃取液真空濃縮干燥，分別得到石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、水提取物。

一種藥物組合物，其包括所述的內(nèi)生真菌發(fā)酵液提取物以及藥學(xué)上可接受的載體。

所述內(nèi)生真菌發(fā)酵液提取物或所述藥物組合物在制備抗真菌或防治真菌感染藥物中的應(yīng)用。

所述內(nèi)生真菌發(fā)酵液提取物或所述藥物組合物在制備防治皮膚病害藥物中的應(yīng)用。

所述內(nèi)生真菌選自HoV3、HoV7或其組合。