[發(fā)明專利]一種醬油中酪胺含量的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810452849.0
• 申請日: 2018-05-13
• 公開（公告）號: CN108645947B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張會香;楊世軍;黃福勇
• 申請（專利權(quán)）人: 桂林理工大學(xué)
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張換君

本發(fā)明提供了一種醬油中酪胺含量的檢測方法，屬于食品分析技術(shù)領(lǐng)域。采用方法為柱前衍生?超高效液相色譜法，使用Waters AcquityⅠclass超高效液相色譜儀，C18柱。本發(fā)明方法樣品用量少，時間短，方法線性良好，操作簡單，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種食品檢測方法，具體涉及一種醬油中酪胺含量的超高效液相色譜檢測方法。

背景技術(shù)：

酪胺(Tyramine)又名對羥基苯乙胺，是一類含氮低分子的生物胺。生物胺作為一類生理活性物質(zhì)，參與生物體內(nèi)的代謝活動。生物胺廣泛存在于各類食品中，在富含蛋白質(zhì)和氨基酸的食品中相對更多，特別是魚類及其制品、乳酪、肉制品和發(fā)酵類食品。食品中的酪胺主要是由相關(guān)微生物產(chǎn)生的脫羧酶催化脫去酪氨酸的羧基而產(chǎn)生，或者是醛和酮通過氨基化和轉(zhuǎn)胺作用產(chǎn)生。因此食品中的生物胺有兩個來源，一是由原材料帶入，二是微生物的脫羧反應(yīng)產(chǎn)生的。因為傳統(tǒng)的發(fā)酵過程難以控制、機理不明晰，天然發(fā)酵食品中的生物胺問題愈發(fā)受到人們關(guān)注。過量攝入生物胺，可能會引發(fā)頭痛、頭暈、惡心、呼吸窘迫、心悸等各種中毒癥狀。所有生物胺中，對人類健康影響最大的是組胺和酪胺。酪胺具有增高血壓的作用，過多攝取酪胺會在體內(nèi)消耗單胺氧化酶抑制劑，從而引起嚴(yán)重的副作用，這就是酪胺又稱干酪毒素的原因。酪胺對人體的危害還表現(xiàn)在促進(jìn)末梢血管收縮，剌激心律加快，增加血糖濃度，消除神經(jīng)系統(tǒng)中的去甲腎上腺素，從而引發(fā)偏頭疼。人體口服酪胺超過100mg可引起偏頭痛，超過1080mg可引起中毒性腫脹，歐盟規(guī)定食品中酪胺含量不得超過100-800mg/kg。

醬油是一種有悠久歷史的食品，用于佐餐和調(diào)味，因其風(fēng)味獨特、味道鮮美、營養(yǎng)豐富而被廣泛制作和食用。但醬油的制作普遍采用自然發(fā)酵的方法，發(fā)酵菌種復(fù)雜，因此存在較高的微生物源性生物胺的安全隱患。出于對食品安全的考慮，人們應(yīng)盡可能降低生物胺的攝入量，而檢測和監(jiān)控食品中生物胺的含量就成為當(dāng)務(wù)之急。由于酪氨酸在發(fā)酵過程中產(chǎn)生酪胺，因此對醬油中酪胺的分析不僅可以保障食品安全，還可以獲得與食品生產(chǎn)和發(fā)酵工藝過程相關(guān)的有用信息。

生物胺的檢測方法有氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、離子色譜法、高效液相色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等等,這些方法具有處理步驟較為繁瑣,分析時間長，不易操作等缺點。本發(fā)明通過超高效液相色譜法(Ultra Performance LiquidChromatography,UPLC)測定酪胺的檢測方法,通過使用小粒徑填料的色譜柱,可以獲得更好的分離效果和更短的分析時間,同時簡化處理步驟。因此本發(fā)明方法具有樣品用量少，時間短，方法線性良好，操作簡單，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高等優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明目的在于簡化樣品預(yù)處理步驟，縮短樣品檢測時間，研究設(shè)計采用UPLC檢測方法快速準(zhǔn)確地測定醬油中酪胺含量。

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取酪胺用0.1M鹽酸配成濃度為1mg·mL^-1的溶液，微孔濾膜0.22μm過濾4℃保存?zhèn)溆谩Ｊ褂玫奶荻葮?biāo)準(zhǔn)工作溶液用0.1M鹽酸稀釋到所需濃度。精密稱取內(nèi)標(biāo)用去離子水配制成濃度為50μg·mL^-1的溶液，微孔濾膜0.22μm過濾4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)樣品溶液的制備：醬油樣品用去離子水稀釋5-20倍，微孔濾膜0.22μm過濾；加50μg·mL^-1內(nèi)標(biāo)溶液100μL，進(jìn)行衍生化反應(yīng)。

(3)衍生化反應(yīng)：取標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品100μL，分別加pH10的飽和碳酸氫鈉100μL和5-10mg·mL^-1丹磺酰氯200μL(溶劑為丙酮)，在50-60℃下避光反應(yīng)10-20min。結(jié)束后加氨水100μL終止反應(yīng)20-30min。加乙腈定容到1mL。微孔濾膜0.22μm過濾。濾液上柱檢測。