[發明專利]一種鑒別蜂蜜真偽的方法

在審

• 申請號: 201810451846.5
• 申請日: 2018-05-12
• 公開（公告）號: CN108490109A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 彭強;張路遙;高靖靜;陳瑞盈
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/95
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

1.一種鑒別蜂蜜真偽的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、高聚合度寡糖的富集

1.1溶解：取2g待測蜂蜜樣品溶于10mL水中；

1.2洗脫：取上述待測蜂蜜樣品溶液10mL上樣于島津蜂蜜中寡糖專用固相萃取小柱，SHIMADZU Special SPE Column Oligosaccharides in honey，200mg硅藻土/500mg活性炭/200mg硅藻土/6mL，30/p，用體積分數20％的乙醇溶液50mL流經固相萃取柱，洗掉單糖、二糖，棄去清洗液；用50％乙醇溶液15mL沖洗固相萃取柱，收集洗脫液；

1.3濃縮：收集的洗脫液40℃減壓濃縮至干，向殘渣中加200μL水渦旋復溶；

步驟2、薄層層析分離寡糖

2.1點樣：各取3μL步驟1濃縮液和濃度2mg/mL的一至七糖標準品，點樣于POLYGRAMSillca gel UV254TLC分析板；

2.2展開：采用二次展開法，第一次展開劑的配比為V乙酸：V乙酸乙酯：V水＝2:2:1.4，展距11cm；第二次展開劑的配比為V乙酸：V乙酸乙酯：V水＝2:2.6:1.4，展距15cm；

2.3顯色：顯色劑為苯胺-二苯胺-磷酸溶液，展開結束后，將顯色劑均勻噴灑在TLC分析板上，用烘干箱85℃烘干30min；

2.4待測蜂蜜樣品的定性分析：由于天然蜂蜜中不含聚合度五以上的寡糖，摻入果葡糖漿的蜂蜜含有聚合度五以上的寡糖，故依據步驟2.3顯色結果進行定性分析，將待測蜂蜜樣品的層析結果與標準品對比，若存在聚合度五以上的寡糖則判斷該樣品為摻假蜂蜜，并繼續下述步驟對摻假蜂蜜進行摻假定量分析；

步驟3、用Image J軟件對摻假蜂蜜樣品進行摻假定量分析

3.1獲取掃描圖像：用Epson Perfection V19掃描儀掃描步驟2.3TLC分析板獲取圖像，各項參數的設置為：顏色全彩，分辨率400dpi，亮度和對比度設置為默認，圖片以JPEG格式保存；

3.2Image J圖像分析：將Image J軟件安裝在電腦上，Windows、Mac OS的平臺上均能運行；

3.3數據處理。

2.根據權利要求1所述的鑒別蜂蜜真偽的方法，其特征在于，步驟3.2具體為：

3.2.1圖像黑白化：啟動Image J，打開步驟3.1掃描得到的圖像，按下列步驟進行操作：選擇圖像、類型、8-bit，然后點擊過程、消除背景影響，在彈出對話框內輸入“100”像素，再點擊編輯、顛倒，轉化圖片；

3.2.2獲得樣品斑點灰度值：打開工具欄，點擊不規則選擇，然后用鼠標將樣品中聚合度大于五的寡糖斑點全部圈出，再使用組合鍵“Ctrl+M”，彈出窗口內“IntDen”列表標題下即為該區域的灰度值。

3.根據權利要求1所述的鑒別蜂蜜真偽的方法，其特征在于，步驟3.3具體為：

3.3.1回歸曲線的建立：按質量分數10％至40％，每10％為一個梯度加入果葡糖漿配制成四個模擬摻假樣品；該摻假蜂蜜樣品重復上述步驟獲得聚合度大于五的全部寡糖斑點的灰度值；摻假蜂蜜的定量分析能單獨關注五糖、六糖、七糖和聚合度大于五的全部寡糖，繪制各寡糖灰度值與摻假比例的標準曲線；比較發現聚合度大于五的全部寡糖灰度值與摻假比例的線性關系最優，故作為定量標曲；

3.3.2摻假量的確定：把步驟3.2.2的寡糖灰度值代入回歸曲線，得到待測蜂蜜樣品的摻假量。