[發明專利]磺胺增效劑半抗原和全抗原及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201810450544.6
• 申請日: 2018-05-11
• 公開（公告）號: CN108680755B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 王戰輝;李紅芳;馬少芹;沈建忠;溫凱
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N27/64;C07K14/795;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發明涉及磺胺增效劑半抗原和全抗原及其制備方法與應用。所述磺胺增效劑半抗原的結構如式(I)所示：其中，R為?(CH₂)₂?COOH、?(CH₂)₄?COOH或本發明提供了3種新型磺胺增效劑半抗原合成方法，其全抗原可將磺胺增效劑類公共母環結構暴露出來作為抗原決定簇，篩選得到廣譜性磺胺增效劑多克隆抗體。利用本發明提供的半抗原與載體蛋白的偶聯物制備磺胺增效劑抗體，制備過程簡單、經濟、靈敏度高、實用價值高，在獸藥殘留檢測中具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及食品安全領域，具體地說，涉及磺胺增效劑半抗原和全抗原及其制備方法與應用。

背景技術

磺胺增效劑是一種二氨嘧啶類抗菌增效劑，與磺胺類藥物合用可使細菌的葉酸代謝受到雙重阻斷，使抗菌譜擴大、抗菌活性增強，對多數革蘭氏陽性菌和陰性菌有效，在獸醫臨床上應用十分廣泛?；前吩鲂╊愃幬锓N類繁多，包括三甲氧芐氨嘧啶(Trimethoprim,TMP)、二甲氧芐氨嘧啶(Diaveridine,DVD)、奧美普林(Ormetoprim,OMP)、巴喹普林(Baquiloprim,BQP)、四氧普林(Tetroxoprim,TXP)、美替普林(Metioprim,MTP)、溴莫普林(Brodimoprim,BOP)、伊卡普林(Iclaprim,IAP)等，其中TMP和DVD是我國最常用的兩種磺胺抗菌增效劑。

磺胺增效劑在動物體內代謝緩慢，殘留在肌肉組織及器官中的時間較長，并可通過食物鏈傳遞，人食用后會產生惡心、嘔吐、腹瀉、過敏等毒副作用及抗藥性。為了保護人類健康，各國對磺胺增效劑都有嚴格的控制法規：日本肯定列表對魚類中磺胺增效劑三甲氧芐氨嘧啶限量要求為50-100μg/kg；歐盟1181/2002/EC中也明確規定其不可用于產蛋類禽養殖業；我國農業部對磺胺增效劑三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧芐氨嘧啶的使用也明確規定其限量不得超過50μg/kg。因此，加強對動物性食品中磺胺增效劑類藥物的監控、檢測很有必要。

免疫分析檢測方法具有較高的靈敏度和特異性，檢測時對樣本的純度要求不高，而且操作簡便，適用于大量樣本的現場快速檢測，在食品檢測領域應用范圍越來越廣。抗原的設計和抗體的制備是免疫分析方法建立的關鍵。因此，設計合成可產生較靈敏抗體及建立免疫分析方法的磺胺增效劑半抗原顯得尤為重要。

發明內容

本發明的目的是提供磺胺增效劑半抗原和全抗原及其制備方法與應用。

為了實現本發明目的，本發明提供的磺胺增效劑半抗原，所述磺胺增效劑半抗原的結構如式(I)所示：

其中，R為-(CH₂)₂-COOH、-(CH₂)₄-COOH或

本發明的磺胺增效劑半抗原為化合物T1、T2、T3，結構分別如式(II)～(IV)所示。

本發明還提供磺胺增效劑全抗原，其是由所述磺胺增效劑半抗原與載體蛋白偶聯后得到的。

本發明所述載體蛋白選自牛血清白蛋白(BSA)、匙孔血藍蛋白(KLH)等。

所述半抗原與載體蛋白偶聯的方法為生物偶聯法-活潑酯法(Active estermethod,NHS)。例如，利用半抗原T1、T2、T3分別制備免疫原T1-KLH、T2-KLH、T3-KLH，以及制備包被原T1-BSA、T2-BSA、T3-BSA。

本發明還提供由所述磺胺增效劑全抗原制備的特異性抗體，所述抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。

優選地，所述抗體是以磺胺增效劑全抗原為免疫原，輔以佐劑免疫實驗動物(如小鼠)，制備得到的多克隆抗體。