[發(fā)明專利]用于二倍體D基因組棉種或四倍體棉種鑒定的引物及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810449623.5
• 申請日: 2018-05-11
• 公開（公告）號: CN108517371B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設計）人: 盧合均;李鵬程;趙艷艷;王坤波;劉方;周忠麗;蔡小彥;王星星;王玉紅;許艷超;侯宇清;張振梅;王春英
• 申請（專利權）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院棉花研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務所(普通合伙) 51241
• 代理人: 李鵬

1.用于二倍體D基因組棉種或四倍體棉種鑒定的引物du01，引物du01的正向引物序列如SEQ ID No.1所示，引物du01的反向引物序列如SEQ ID No.2所示。

2.根據(jù)權利要求1所述的引物du01在二倍體D基因組棉種或四倍體棉種鑒定上的應用。

3.用于二倍體D基因組棉種或四倍體棉種鑒定的試劑盒，其特征在于，包含有權利要求1所述的引物du01。

4.一種鑒定棉花二倍體D基因組棉種或四倍體棉種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)使用權利要求1所述引物du01，以待測棉種的核基因組全部DNA為模板進行PCR擴增；

(2)PCR擴增產(chǎn)物做電泳檢測；如果得到一條750bp的目的產(chǎn)物，則待測棉種為棉花二倍體D基因組棉種和/或四倍體棉種。

5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于：PCR擴增體系為：du01正向引物和反向引物各0.5μL，總DNA 4μL，2×Taq Mix5μL；反應體系為10μL；PCR擴增程序為：95℃預變性5分鐘；94℃變性30秒；58℃退火35秒；72℃延伸1分鐘；30個循環(huán)；72℃保持5分鐘，10℃存放。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述Taq Mix由Taq酶、dNTP、Buffer組成，Taq Mix中Taq酶的濃度為2×，dNTP的濃度為1mM，Buffer由1000mM KCl，200mM pH 8.3的Tris-HCl，30mM MgCl₂組成。

7.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，所述電泳為瓊脂糖凝膠電泳。