[發(fā)明專利]惡臭假單胞菌MRP-2及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810448103.2
• 申請日: 2018-05-11
• 公開（公告）號: CN108467844B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李敏;滕澤棟;邵文;張克瑤
• 申請（專利權(quán)）人: 北京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;B09C1/10;C12R1/40
• 代理公司: 北京法信智言知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 劉靜榮

本發(fā)明涉及環(huán)境保護領(lǐng)域，具體涉及惡臭假單胞菌MRP?2及其應(yīng)用。所述惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)MRP?2保藏編號為CGMCC NO.15337。本發(fā)明篩選得到的菌株對難溶性磷具有一定的活化效果，并且可以在較高重金屬壓力環(huán)境下生存并發(fā)揮功能，具有易培養(yǎng)、成本低廉的特征。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及環(huán)境保護領(lǐng)域，具體涉及惡臭假單胞菌MRP-2及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

土壤重金屬污染具有隱蔽性和持久性，目前越來越多的生物技術(shù)被應(yīng)用于土壤重金屬污染的修復(fù)，但往往存在修復(fù)植株生長緩慢的問題。解磷微生物能夠依靠自身的代謝產(chǎn)物或通過與其他生物的協(xié)同作用，將土壤中的難溶性磷轉(zhuǎn)化為可供植物吸收利用的磷，從而在一定程度上解決重金屬污染土壤修復(fù)植物生長緩慢的問題。但現(xiàn)有解磷微生物對重金屬的耐受性普遍較低，不能在較高濃度的重金屬壓力下生存并發(fā)揮作用，因此需要找到合適的具有重金屬抗性的解磷微生物，使其可以在重金屬污染土壤的植物-微生物聯(lián)合修復(fù)過程中對植物根系進行保護，活化根際區(qū)域磷素，促進植株生長，進而增強重金屬修復(fù)植物的生存競爭力和修復(fù)效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供具有解磷能力且有一定重金屬抗性的惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)MRP-2；

本發(fā)明從重金屬污染土壤中篩選到無機解磷菌，確定為惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)，于2018年2月2日送交中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，其保藏編號為：CGMCC NO.15337。

本發(fā)明的再一目的是提供上述惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)在重金屬環(huán)境下的應(yīng)用，重金屬包括：鉛、鉻。

本發(fā)明還提供了包含上述惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)MRP-2的土壤修復(fù)菌劑。

本發(fā)明篩選得到的菌株對難溶性磷具有一定的活化效果，并且可以在較高重金屬壓力環(huán)境下生存并發(fā)揮功能，具有易培養(yǎng)、成本低廉的特征。本發(fā)明篩選得到的菌株對環(huán)境友好，不會產(chǎn)生二次污染，可用于土壤重金屬污染的植物-微生物聯(lián)合修復(fù)工程。

附圖說明

圖1顯示惡臭假單胞菌在平板培養(yǎng)基中的解磷圈；

圖2顯示惡臭假單胞菌在磷酸三鈣培養(yǎng)基中48小時內(nèi)對磷素的活化能力；

圖3顯示在鉛、鉻壓力下，惡臭假單胞菌生長量的變化。

惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)MRP-2于2018年2月2日送交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)(地址，北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，100101)，其保藏編號為：CGMCC NO.15337。

具體實施方式

以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。

實施例1具有重金屬抗性解磷菌的篩選

以重金屬污染土壤為細菌來源，將采集來的土壤樣品放在-20℃保存。待實驗時，將土壤樣品解凍至常溫，稱取10g土壤至90mL無菌水中，在120rpm震蕩30min后，制成土壤懸液。梯度稀釋，對10^-5～10^-3稀釋梯度用移液槍各取0.1mL菌液至磷酸三鈣固體培養(yǎng)基中，涂布均勻，倒置于28℃恒溫培養(yǎng)箱7d，觀察平板中菌落生長情況與溶磷圈產(chǎn)生(如圖1所示)，將產(chǎn)生解磷圈的菌種，采用平板涂布和分區(qū)劃線法，經(jīng)多次分離純化，最終獲得具有解磷能力的菌株，并將其接種在牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上，于4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>