[發(fā)明專利]人工抗原遞呈細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810446873.3
• 申請(qǐng)日: 2018-05-11
• 公開（公告）號(hào): CN110464848B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬潔;張彤;袁偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院;北京醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K47/69
• 分類號(hào): A61K47/69;A61K39/395;A61K47/02;A61K47/59;A61K47/66;A61P35/00;A61P37/02;A61P37/06;C12N5/0783
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• 代理人: 關(guān)暢

本發(fā)明公開了一種人工抗原遞呈細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明建立了一種對(duì)聚合物微球表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)形貌控制方法，經(jīng)過信號(hào)分子修飾發(fā)揮微球抗原遞呈功能，可用于刺激免疫細(xì)胞擴(kuò)增和活化。本發(fā)明使用的材料具有生物相容性、可降解性，且這種制備表面粗糙結(jié)構(gòu)的方法操作簡便、環(huán)保，重現(xiàn)性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞治療及免疫治療領(lǐng)域，具體涉及一種人工抗原遞呈細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來T細(xì)胞免疫治療研究發(fā)展迅速，尤其是基因工程T細(xì)胞的出現(xiàn)顯著提高了免疫治療的特異性和殺傷強(qiáng)度，并在急性B淋巴細(xì)胞白血病的治療中首次獲得巨大成功(Brentjens et al.,2011)。截至目前，基因改造T細(xì)胞免疫治療已在多種惡性腫瘤中相繼開展大量臨床試驗(yàn)，使T細(xì)胞免疫治療成為最具價(jià)值和發(fā)展?jié)摿Φ男滦涂鼓[瘤療法(Johnson and June,2017)。為獲得足夠量T細(xì)胞，采用自體DC細(xì)胞在體外刺激擴(kuò)增T細(xì)胞已開展大量研究(Wang et al.,2014)。盡管DC細(xì)胞表現(xiàn)出了對(duì)T細(xì)胞激活的重要作用，但體外分離、誘導(dǎo)活化DC細(xì)胞操作復(fù)雜、培養(yǎng)周期長，原代DC細(xì)胞的大規(guī)模制備困難；另外DC細(xì)胞活化狀態(tài)不穩(wěn)定，造成刺激T細(xì)胞效果批間差異大；更重要的是DC細(xì)胞會(huì)通過表達(dá)抑制性信號(hào)分子防止T細(xì)胞過度活化，由于缺乏對(duì)這種負(fù)調(diào)節(jié)的控制，會(huì)嚴(yán)重影響刺激T細(xì)胞的功能和后續(xù)治療效果(Steinman and Banchereau,2007)，難以形成商品。人工抗原遞呈細(xì)胞(artificial antigen presenting cells，aAPCs)的出現(xiàn)，可以實(shí)現(xiàn)根據(jù)需要向T細(xì)胞遞呈不同的信號(hào)分子，以達(dá)到穩(wěn)定、高效的激活效果。

aAPCs是通過在載體表面整合T細(xì)胞活化所必需的信號(hào)分子，來模擬抗原遞呈過程的一種方法。除信號(hào)分子外，載體的形貌，尤其是表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)直接影響aAPCs功能。研究顯示，載體表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)會(huì)影響蛋白類信號(hào)分子在aAPCs表面的空間結(jié)構(gòu)、生物學(xué)活性，以及與T細(xì)胞相互作用的接觸面積(Fadel et al.,2010)。這些因素直接影響T細(xì)胞免疫突觸的形成，因此是aAPCs研制中需要重點(diǎn)考慮的設(shè)計(jì)因素。由于高分子聚合物載體形貌難于控制，所以目前aAPCs拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的研究主要采用無機(jī)碳納米管和介孔硅材料。但FDA批準(zhǔn)的醫(yī)用高分子聚合物具有生物相容性好，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，是aAPCs載體的最優(yōu)選擇。因此開發(fā)具有表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的高分子聚合物aAPCs具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種人工抗原遞呈細(xì)胞及其制備方法與應(yīng)用。

本發(fā)明要求保護(hù)的人工抗原遞呈細(xì)胞(aAPCs)，由表面具有粗糙拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的實(shí)心聚合物微球和信號(hào)分子組成；

所述實(shí)心聚合物微球中包載有四氧化三鐵納米粒子。

本發(fā)明還要求保護(hù)一種表面具有粗糙拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的實(shí)心聚合物微球以及該表面具有粗糙拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的實(shí)心聚合物微球在制備人工抗原遞呈細(xì)胞中的應(yīng)用；

所述實(shí)心聚合物微球內(nèi)部包載四氧化三鐵納米粒子。

具體的，所述信號(hào)分子為生物素偶聯(lián)信號(hào)分子；

所述實(shí)心聚合物微球表面修飾有親和素；

所述信號(hào)分子與所述實(shí)心聚合物微球通過生物素-親和素系統(tǒng)方式結(jié)合。

構(gòu)成所述實(shí)心聚合物微球中的聚合物選自PLLA、PDLA、PLA、PLGA或PGA；

所述實(shí)心聚合物微球的粒徑為2μm-10μm；

所述四氧化三鐵納米粒子的粒徑為7nm-30nm；具體為15nm；

所述生物素偶聯(lián)信號(hào)分子為T細(xì)胞激活抗體。

更具體的，所述T細(xì)胞激活抗體為anti-CD3和anti-CD28抗體；具體為摩爾比為1:1的anti-CD3和anti-CD28抗體。