[發明專利]桑樹類糖原合成酶激酶基因及其檢測和應用

有效

• 申請號: 201810445650.5
• 申請日: 2018-05-10
• 公開（公告）號: CN108611334B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 李瑞雪;汪泰初;趙衛國;王鈺婷;夏家鳳;王偉
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院蠶桑研究所
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 安徽省蚌埠博源專利商標事務所(普通合伙) 34113
• 代理人: 楊晉弘

本發明公開了一種桑樹類糖原合成酶激酶基因及其檢測和應用。其中桑樹類糖原合成酶激酶基因(下稱MmSK基因)及其蛋白的序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本發明技術方案為在mRNA水平對桑樹MmSK基因的相對表達量進行定量分析提供了技術平臺，并為研究MmSK基因表達調控機理及生物學功能奠定基礎，同時本發明技術方案還可以標識植物是否處于干旱、高鹽、低溫等生長環境。

技術領域

本發明涉及植物基因工程領域，尤其涉及一種桑樹類糖原合成酶激酶基因(MmSK)和用于檢測MmSK基因表達的特異性引物及其在脅迫條件下的表達。

背景技術

植物中的類糖原合成酶激酶(Shaggy-like kinase，SK)是果蠅(Drosophilamelanogaster)shaggy(SGG)基因和哺乳動物中糖原合成酶激酶(Glycogen-SynthaseKinase-3，GSK-3)的同源物，同屬于絲氨酸/蘇氨酸類蛋白激酶，具有高度保守性。現有的證據表明，植物GSKs可能參與植物的非生物脅迫應答、傷害應答、器官發育以及油菜素內酯等信號轉導等一系列生命活動進程。

目前，在擬南芥、水稻、小麥、煙草等植物中SK類基因的研究較多，但對桑樹中的SK類基因研究還比較少。我國是桑樹的起源中心，種質資源極為豐富。經過桑樹種質資源及育種工作者幾十年的努力，現在全國已收集保存有近3000份桑樹種質資源，其中不少資源都具有果用價值、藥用價值、經濟價值等。我們用克隆得到的魯桑品種(Morus multicaulis)育71-1 MmSK基因ORF序列，通過生物信息學分析其序列特征。同時，建立MmSK基因實時熒光RT-PCR檢測方法，并利用該方法檢測了MmSK基因在干旱、高鹽、低溫、ABA脅迫條件下的轉錄水平的變化規律。通過對該基因的研究，使我們更好地了解桑樹MmSK基因在不同脅迫條件下的表達情況及其在桑樹響應逆境脅迫中發揮的作用及分子機制。

發明內容

本發明要解決的一個技術問題是提供一種桑樹類糖原合成酶激酶基因(MmSK)克隆和其在非生物脅迫條件下的表達，可以分析桑樹類糖原合成酶激酶基因在環境脅迫下的表達調控。

本發明要解決的另外一個技術問題是提供兩對用于熒光RT-PCR技術檢測桑樹類糖原合成酶激酶基因表達的特異性引物。

對于桑樹類糖原合成酶激酶基因，本發明采用的技術方案是，其核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

上述桑樹類糖原合成酶激酶基因作為植物非生物脅迫表達標志物中的應用。

作為優選，所述植物為桑樹，其拉丁文學名為Morus mul ticaulis。

作為優選，所述的非生物脅迫為干旱、高鹽、低溫脅迫。

對于桑樹類糖原合成酶激酶相關基因編碼的蛋白，本發明采用的技術方案是，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

上述桑樹類糖原合成酶激酶相關基因編碼的蛋白作為植物非生物脅迫表達標志物中的應用。

作為優選，所述植物為桑樹，其拉丁文學名為Morus multicaulis。

作為優選，所述的非生物脅迫為干旱、高鹽、低溫脅迫。

對于用于熒光RT-PCR技術檢測桑樹類糖原合成酶激酶基因表達的特異性引物，本發明采用的技術方案是，特異性引物為符合熒光PT-PCR反應特點的特異性上下游引物，該特異性上下游引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；以及作為內參基因的桑樹β-actin基因的特異性上下游引物，該特異性上下游引物的核苷酸序列分別如SEQID N0.5和SEQ ID NO.6所示。

本發明的有益效果是：