[發明專利]利用牛奶廠高濃度有機廢水培養綠藻A.dimorphus制取脂質和多糖的方法

在審

• 申請號: 201810444805.3
• 申請日: 2018-05-10
• 公開（公告）號: CN108624631A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 宋春風;張爾雅;凌億鋒;呂希晰;宋晨;萬芮含;劉錚錚;王立國
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12P19/04;C12R1/89
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 程小艷

1.利用牛奶廠高濃度有機廢水培養綠藻A.dimorphus制取脂質和多糖的方法，其特征在于，使用原始牛奶廠廢水而不需要稀釋或滅菌，包括如下步驟：

1)廢水的預處理：牛奶廢水經過濾后置于4℃冷藏保存，不進行任何稀釋或滅菌處理；

2)綠藻A.dimorphus的培養：向三個1L錐形瓶中分別加入未經滅菌和稀釋的原始牛奶廢水500ml，分別接種體積為8-10％(V_接種物/V_培養基)的活性綠藻A.dimorphus，控制吸光度為0.5-1.0；

培養條件：溫度34-36℃，光強度為60-70μmol/m²·s的冷白熒光燈，光暗比為12:12h條件下培養8-10天且每天進行3-4次搖瓶；

3)綠藻A.dimorphus中脂質的測定；

4)綠藻A.dimorphus中多糖的測定。

2.根據權利要求1所述的利用牛奶廠高濃度有機廢水培養綠藻A.dimorphus制取脂質和多糖的方法，其特征在于，所述步驟3)綠藻A.dimorphus中脂質的測定具體步驟如下：

(1)取綠藻樣品離心，棄上清液；

(2)取綠藻固體在60-70℃下烘干至恒重，并稱量綠藻細胞干重；

(3)用氯仿-甲醇混合溶劑(1:2，V/V)從烘干后的200mg綠藻樣品中萃取脂質；

(4)在室溫下超聲波作用2-5min，4-5次，再離心分離；

(5)將上清液過濾后轉移至預先稱重的玻璃燒杯中，在60℃的烘箱中蒸發溶劑；

(6)通過稱重測定脂質質量，計算脂質含量：

脂質含量(％)：

3.根據權利要求1所述的利用牛奶廠高濃度有機廢水培養綠藻A.dimorphus制取脂質和多糖的方法，其特征在于，所述步驟5)綠藻A.dimorphus中多糖的測定具體步驟如下：

(1)培養8-10天后，取50ml綠藻樣品，在轉速9000rpm下離心5min，棄上清液；

(2)取綠藻固體在60℃下烘干至恒重，并稱量綠藻細胞干重；

(3)將烘干的綠藻固體研磨成粉末狀，在200mg綠藻樣品加入蒸餾水30ml，在100℃下水浴2h；

(4)取上清液20ml，轉速9000rpm離心5min，再通過真空泵中速濾紙過濾；

(5)取2ml濾液加入6ml無水乙醇于4℃下沉淀12h；

(6)將乙醇沉淀后的樣品離心，轉速9000rpm離心5min，舍棄上清液；

(7)將沉淀物溶于2ml蒸餾水中，充分搖勻；

(8)分別取1.0、0.5、0.2、0.1ml多糖水溶液稀釋至1.0ml；

(9)使用移液管分別加入5％苯酚0.5ml及濃硫酸2.5ml，充分搖勻；

(10)放入100℃水浴鍋中20min，冷卻至室溫；

(11)在490nm處進行紫外分光光度法測定，根據吸光度查找標準曲線計算多糖含量：

多糖含量(％)：

4.根據權利要求1所述的利用牛奶廠高濃度有機廢水培養綠藻A.dimorphus制取脂質和多糖的方法，其特征在于，所述步驟1)中牛奶廢水原始水質：磷酸鹽5.96±0.04mg/L，氨氮277.40±10.75mg/L,化學需氧量2593.33±277.37mg/L,總有機碳116.23±4.3,總無機碳373.20±5.47mg/L。