[發明專利]一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法在審
| 申請號： | 201810440250.5 | 申請日： | 2018-05-04 |
| 公開（公告）號： | CN109010366A | 公開（公告）日： | 2018-12-18 |
| 發明（設計）人： | 王毅慶;張旭東;盧乾;謝曼曼;王子陽;倪軻娜;何憶霖;韓久園 | 申請（專利權）人： | 南京大學 |
| 主分類號： | A61K35/12 | 分類號： | A61K35/12;A61K49/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210093 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 淋巴結 高轉移 兔頸部 腫瘤 淋巴結轉移 腫瘤模型 熒光 淋巴結清掃術 氨基酮戊酸 光動力診斷 內源性物質 生物學特性 代謝產物 快速檢測 快速精準 臨床特征 模型建立 生物醫療 實時檢測 腫瘤細胞 大動物 可視化 原卟啉 舌癌 切除 檢測 治療 應用 成功 研究 | ||
1.一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)獲取兔上皮鱗癌VX2組織塊；
(2)建立兔舌癌模型；
(3)建立兔頸部淋巴結轉移模型；
(4)建立兔頸部高轉移淋巴結模型；
(5)使用熒光顯影劑對腫瘤轉移淋巴結進行實時可視化診斷；
(6)采集腫瘤轉移淋巴結熒光光譜數據，根據光譜數據劃分閾值，判斷轉移與非轉移淋巴結。
2.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(3)的具體步驟包括：
①將舌癌荷瘤兔進行培養；
②飼養15天-45天后篩選頸部發生淋巴結轉移的荷瘤兔。
3.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(4)的具體步驟包括：
①無菌摘取發生頸部淋巴結轉移的荷瘤種兔的頸部轉移淋巴結，選取淋巴結中魚肉樣組織，使用眼科剪將其剪碎至0.5mm3-1.5mm3，形成淋巴結癌組織塊懸濁液；
②將取得的組織塊懸濁液接種在兔舌右側中間部位舌緣處，繼續建立兔舌癌模型；
③待荷瘤兔出現淋巴結轉移后，重復上述步驟，將轉移淋巴結制作成組織塊，接入下一批新西蘭大白兔舌部；
④通過上述步驟不斷篩選具有高轉移特性的淋巴結組織塊進行接種，以形成高淋巴結轉移的兔舌癌模型。
4.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(5)的具體步驟包括：
①取有轉移淋巴結的新西蘭大白兔，經耳緣靜脈注射5-氨基酮戊酸(5-ALA)，避光放置；
②避光結束后，將淋巴結轉移兔麻醉，打開頸部皮膚，暴露頸部淋巴結；
③使用激光照射開放部位；
④使用相機記錄激發光圖像。
5.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(5)所使用的5-ALA劑量為5mg/kg-50mg/kg。
6.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(5)的避光時間為2小時-10小時，所使用的激光峰值在350nm-450nm。
7.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(5)所使用的激光光源的功率為10mw/cm2-100mw/cm2。
8.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(5)所使用的激光光源距離樣本的距離為10cm-80cm。
9.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(6)的具體步驟包括：
①使用激光激發頸部淋巴結；
②使用光譜儀采集所有的淋巴結的光譜數值，記錄不同光譜數值；
③根據熒光數值對所有的淋巴結進行分類，劃分閾值，區分轉移與非轉移淋巴結。
10.如權利要求1所述的一種腫瘤淋巴結高轉移模型的建立及熒光快速檢測方法，其特征在于，所述步驟(6)使用的激光峰值在350nm-450nm，點光源到淋巴結的探測距離為2cm-10cm。
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