[發明專利]血清中鳥嘌呤的測定方法

在審

• 申請號: 201810439369.0
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN109085160A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發明（設計）人: 李立和;張超;李錚
• 申請（專利權）人: 天津市寶坻區人民醫院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種血清中鳥嘌呤的測定方法，屬于利用可見光，通過測試反應結果顏色的變化來測試材料的方法。本發明的技術方案是：試劑II中僅有鳥嘌呤脫氨酶有效組分，指示劑及其它有效組分同在試劑I中；其測定方法為：血清先與試劑Ⅰ于37℃溫浴3～5分鐘，血清中游離氨與試劑Ⅰ中α?酮戊二酸、NADH在谷氨酸脫氫酶作用下生成NAD⁺，加入試劑Ⅱ后于37℃溫浴4～7分鐘，鳥嘌呤在鳥嘌呤脫氨酶水解后生成氨，經反應生成NAD⁺，儀器在334nm～340nm波長處檢測，以試劑Ⅰ反應產生的NAD⁺為空白，由試劑Ⅱ反應產生的NAD⁺可直接測出鳥嘌呤的含量。本發明檢測時不受內源性游離氨影響，本方法是一種快捷、準確性更高的血清中鳥嘌呤檢測方法。

技術領域

本發明屬于一種包含酶的測定方法；或是利用可見光，通過測試反應的結果產生顏色變化來測試材料的方法，特別是涉及一種用生化分析儀快捷、準確檢測血清中鳥嘌呤的測定方法。

背景技術

鳥嘌呤是一種有機堿，廣泛存在于動、植物界,化學名稱為2-氨基-6-氧嘌呤，無色正方形晶體或結晶性粉末，在含有過量氨存在的水溶液中，慢慢蒸去水得小菱形晶體，熔點360℃(分解并部分升華),溶于氨水、苛性堿及稀礦酸液，微溶于乙醇、乙醚，對紫外線有強烈的吸收性，為鳥苷和鳥苷酸的組成成分。其鹽酸鹽為單水合粉末狀晶體，在100℃時失水，200℃時失去氯化氫，溶于酸化的水。鳥嘌呤可由魚鱗經鹽酸水解而得。為組成核酸的重要堿基，是DNA和RNA 中4種主要堿基之一，也是各種鳥苷酸的組成分。其N9與核糖或脫氧核糖C1 以β-糖苷鍵連接而成鳥苷或脫氧鳥苷。

臨床實驗室采用生化分析儀測定血清中鳥嘌呤，其方法是試劑I中含有NH₃、α-酮戊二酸、NADH，試劑II中僅有鳥嘌呤脫氨酶酶有效組分，指示劑及其它有效組分同在試劑I中；血清中游離氨與試劑Ⅰ中α-酮戊二酸、NADH在谷氨酸脫氫酶作用下生成NAD⁺，加入試劑Ⅱ后于37℃溫浴4～7分鐘，鳥嘌呤在鳥嘌呤脫氨酶作用下水解后生成氨，經反應生成NAD⁺，儀器在334nm～340nm波長處檢測，以試劑Ⅰ反應產生的NAD⁺為空白，由試劑Ⅱ反應產生的NAD⁺可直接計算(測)出鳥嘌呤的含量。本發明檢測時不受內源性游離氨影響，本方法是一種快捷、準確性更高的血清中鳥嘌呤檢測方法。

發明內容：

為了能簡單、方便、快捷及準確地測定血清中鳥嘌呤，本發明提供一種經濟方便易行，準確性高、能夠不受內源性氨影響的血清中鳥嘌呤的測定方法。

本發明采用的技術方案是：試劑Ⅰ中含有谷氨酸脫氫酶，α-酮戊二酸， NADH及適量防腐劑；試劑Ⅱ內含有鳥嘌呤水解酶及適量防腐劑，其測定方法為：待測血清樣品先與試劑Ⅰ于37℃溫浴3～5分鐘，血清中游離氨與試劑Ⅰ反應生成NAD⁺，加入試劑Ⅱ后于37℃溫浴4～7分鐘，鳥嘌呤在鳥嘌呤脫氨酶水解后產生氨，經反應也生成NAD⁺；儀器在334nm～340nm波長處檢測，以試劑Ⅰ反應產生的NAD⁺為空白，從試劑Ⅱ反應產生的NAD⁺計算出鳥嘌呤的含量，計算公式為：

OD_鳥嘌呤＝OD₂-OD₁×[SV+R₁V₁)/(SV+R₁V₁+R₂V₂)]

鳥嘌呤濃度＝F×OD_鳥嘌呤