[發明專利]一種用于燒燙傷的快速修復液及其制備方法

在審

• 申請號: 201810439269.8
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN108543064A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 吳金蕓;葉華衍
• 申請（專利權）人: 伯仕利生物科技發展（鹽城）有限公司
• 主分類號: A61K38/39
• 分類號: A61K38/39;A61P17/02;A61K38/18
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王鑫

本發明涉及一種用于燒燙傷的快速修復液及其制備方法。使用常規分離獲得的干細胞，經分子克隆技術“過表達”人纖維連接蛋白（fibronectin，FN），利用富含各種自分泌的細胞因子和過表達FN的該干細胞培養上清，應用于燒燙傷患者和久治不愈潰瘍創面的修復治療。該發明方法簡便易行，適用于不同來源的干細胞培養上清的大規模生產。并將該類產品應用于燒燙傷患者和久治不愈潰瘍創面的修復治療。為干細胞應用于醫學轉化事業提供一條新的路徑。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于燒燙傷的快速修復液及其制備方法。

背景技術

有研究報道，嚴重創傷、大面積燒傷、整形術后的創面覆蓋已經成為了一個十分重要的問題，除了患者自體植皮外，人們采用過同種異體植皮，以及其他相關修復材料來覆蓋創面，但是無論自體或異體皮膚移植均受到供體來源和免疫排斥反應的限制。亟待尋找一種理想的無排斥反應、促進皮膚損傷修復、促進皮膚再生的天然藥物。

干細胞具有獨特的分化潛能，能治愈組織難以自愈的創傷，能治療臨床上難以治愈的疾病，干細胞是一種具有自我復制功能和多分化潛能的早期未分化細胞，醫學界稱之為“萬用細胞”。干細胞具有各種各樣的生物學特性，最主要的是具有自我更新和多向分化潛能及無限增殖能力。干細胞還具有分泌多種細胞因子的能力，人表皮細胞生長因子(EGF)、人角質細胞生長因子（KGF）、人成纖維細胞生長因子（FGF）、人血小板樣衍生生長因子（PDGF）、纖維連接蛋白（FN）等。

間充質干細胞 (mesenchymal stem cells，MSC) 是一組源于基質的異質細胞群，可以從人體大多數組織獲取。大量實驗研究顯示，間充質干細胞具有表皮細胞分化潛能，可促進受創皮膚的愈合。骨髓源性間充質干細胞由于存在病毒污染的隱患，且隨著供者年齡增長，其細胞數量和擴增、分化能力出現明顯下降趨勢，不適合批量制備。而表皮干細胞是存在于表皮基底層和毛囊根部之間的間隙中一種皮膚干細胞，作為皮膚組織的特異性干細胞，不僅能夠維持皮膚新陳代謝的主要功能細胞，還與創面的修復緊密相關，在創面環境中分化為角質化細胞，轉移至皮膚創面而修復皮膚創面。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供一種用于燒燙傷的快速修復液及其制備方法，該快速修復液能夠促進表皮細胞生長，縮短創口愈合時間。使用常規分離獲得的干細胞，經分子克隆技術“過表達”人纖維連接蛋白（fibronectin，FN）。利用富含各種自分泌的細胞因子和過表達FN的該干細胞培養上清，應用于燒燙傷患者和久治不愈潰瘍創面的修復治療。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種用于燒燙傷的快速修復液，包括含有表皮細胞生長因子、人角質細胞生長因子、人成纖維細胞生長因子、人血小板樣衍生生長因子和纖維連接蛋白干細胞的培養上清液。

本發明所述培養上清液的濃度為大于或等于1×10¹⁰個/ml。

本發明提供一種用于燒燙傷的快速修復液在燒燙傷患者和久治不愈潰瘍創面的修復治療中的應用。

本發明提供一種用于燒燙傷的快速修復液在外傷創面、預防疤痕的形成中的應用。

本發明提供一種用于燒燙傷的快速修復液的制備方法，包括以下步驟：

⑴、常規間充質干細胞的分離，獲取間充質干細胞；

⑵、利用分子克隆技術，將纖維連接蛋白基因導入步驟⑴獲得的間充質干細胞進行過表達；按實驗室常規步驟⑴中獲得的臍帶間充質干細胞進行轉染；次日，換新鮮的含800μg/mlG418的opti-MEM換液，繼續培養一周；

⑶、收集細胞培養上清，并檢測其培養上清液中纖維連接蛋白的表達情況；包括以下步驟：

①將細胞擴增傳代至大約二十代后，細胞數量≥10¹⁰；

②換成新鮮的無血清干細胞培養基，繼續培養3天；