[發明專利]一種通過高效液相色譜測定芍藥苷含量的方法

在審

• 申請號: 201810438551.4
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN108459111A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 陳超;李永強;黃瑛;溫霖;李愛民;李穎
• 申請（專利權）人: 國珍健康科技（北京）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明涉及一種通過高效液相色譜測定芍藥苷含量的方法，包括如下步驟：1)采用體積分數為75～85％的甲醇的水溶液從含有芍藥苷的待測樣品中提取芍藥苷，得待測液；2)將所述待測液通入高效液相色譜儀，采用反相C18色譜柱，以體積分數為0.02％的磷酸為流動相A，甲醇和乙腈的體積比為5:1的混合液為流動相B，進行梯度洗脫。該方法的回收率位于95.56～106.85％之間，檢出限及定量限分別為285.1ng/mL，822.8ng/mL，RSD為0.014％?0.58％。該方法用于實際測定某批樣品三次，樣品中芍藥苷含量在1.942％?1.997％之間。

技術領域

本發明涉及液體色譜分析檢測領域，具體涉及通過高效液相色譜測定芍藥苷含量的方法。

背景技術

牡丹皮為毛莨科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。具有清熱涼血，活血散瘀功效。用于溫毒發斑或發疹，陰虛發熱，無汗蒸骨，腸癰，癰腫瘡毒，肝火頭痛，閉經，痛經，跌撲損傷。現代研究表明，牡丹皮酚類及其苷、單萜及其苷類成分為主要有效成分。目前，對牡丹皮中酚類成分丹皮酚的質控方法已有較多報道，而對其單萜苷類成分的質控方法較少。我們以單萜類成分芍藥苷為代表，建立了HPLC測定牡丹皮中芍藥苷的方法，為牡丹皮藥材及飲片的質量控制提供參考依據。

發明內容

本發明的目的是提供一種牡丹皮中芍藥苷的準確檢測方法，包括如下步驟：

1)采用體積分數為75～85％的甲醇的水溶液從含有芍藥苷的待測樣品中提取芍藥苷，得待測液；

2)將所述待測液通入高效液相色譜儀，采用反相C18色譜柱，以體積分數為0.02％的磷酸為流動相A，甲醇和乙腈的體積比為5:1的混合液為流動相B，進行梯度洗脫，梯度洗脫的程序為0-3min流動相B的體積分數增加至15％，3-5min流動相B的體積分數由15％增加至30％，5-10min流動相B的體積分數維持在30％，10-15min，流動相B的體積分數下降至10％。

優選的，所述待測樣品為牡丹皮粉末。

優選的，所述牡丹皮粉末的直徑小于50目。

優選的，所述步驟1)中采用體積分數為80％的甲醇的水溶液提取芍藥苷。濃度為80％的甲醇的水溶液可最大限度地將芍藥苷進行提取。

優選的，所述待測樣品與甲醇的水溶液的質量體積比1:18～22。在上述質量體積比的情況下，既可將芍藥苷進行充分地提取，還不會帶來提取液的浪費。

優選的，所述步驟1)具體為：將待測樣品與甲醇的水溶液混合，在功率400～600W的超聲條件下處理25～35min，然后渦旋混勻，離心，取上清液，重復上述操作至少一次，并將多次得到的上清液混合后過0.45μm的濾膜，即得所述待測液。通過上述操作，可將待測樣品中的芍藥苷充分地提取出來。

優選的，所述步驟2)中控制流速為0.8～1.2mL·min^-1，優選為1.0mL·min^-1；

優選的，柱溫為33～37℃，優選為30℃。

優選的，所述步驟2)中檢測器為紫外檢測器，檢測波長為230nm；

優選的，進樣量為20μL。

作為優選的方案，本發明的方法包括如下步驟：

(1)取芍藥苷標準品，以甲醇為溶劑，按照濃度梯度配制多份標準品溶液；