[發明專利]一種高效價的抗agra的抗體的制備方法在審
| 申請號： | 201810435097.7 | 申請日： | 2018-04-26 |
| 公開（公告）號： | CN108707197A | 公開（公告）日： | 2018-10-26 |
| 發明（設計）人： | 趙鵬偉;白瑞霞;張福全;崔珈銜;孫鵬;陸景坤;牛燕;趙方新;張烜;紅梅 | 申請（專利權）人： | 內蒙古醫科大學 |
| 主分類號： | C07K16/12 | 分類號： | C07K16/12;C12N15/70;C07K16/06 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 010110 內蒙古*** | 國省代碼： | 內蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 高效價 抗體 制備 分離純化 蛋白 金黃色葡萄球菌 大腸桿菌載體 大腸桿菌 氨芐青霉素 多克隆抗體 標記基因 血清抗體 原核表達 載體連接 表達量 受體菌 血清 得率 構建 酶切 鼠抗 鼠源 體內 轉入 基因 檢測 | ||
1.一種高效價的抗agra的抗體的制備方法，其特征在于，以大腸桿菌作為受體菌，抗氨芐青霉素為標記基因；將金黃色葡萄球菌中的agrA基因轉入大腸桿菌載體中進行原核表達，并分離純化得到agrA蛋白；然后將分離純化的蛋白注入SD大鼠體內收集血清，制備鼠源的多克隆抗體。
2.如權利要求1所述的一種高效價的抗agra的抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一、通過全式金的pEASY載體得到含有有重組質粒pEASY/agrA菌種；
步驟二、大量誘導表達并純化表達蛋白
將凍存的含有重組質粒pEASY/agrA菌種接種于200ml LB/Amp+培養基中大量表達，230rpm、37℃培養4小時，菌液加入200μl的IPTG誘導表達，230rpm、37℃再誘導5小時后收集菌體。純化蛋白利用Ni-NTA Sefinose方法進行純化，并進行透析；
步驟三、抗體制備
第一階段注射抗原：取大鼠鼠注射抗原，0.25ml提取蛋白與0.25mlFreund’sAdjuvant，Complele混勻/每只用量；同時采血；
第二階段注射抗原：第一階段注射抗原結束時隔十五日，進行第二階段注射抗原，0.25ml提取蛋白與0.25mlFreund’sAdjuvant，Incomplele混勻/每只用量，同時采血；
第三階段注射抗原：重復第二階段注射抗原步驟；
第四階段注射抗原：同上；
取上清液：靜止30分鐘后，至于高速離心機中離心，4000轉/每分鐘溫度4℃處理10分鐘，離心完成，取出各管上清液；將提取的上清液至-20℃保存。
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