[發明專利]一種檢測辣椒細胞質雄性不育恢復基因的分子標記

有效

• 申請號: 201810434557.4
• 申請日: 2018-05-09
• 公開（公告）號: CN108330208B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 樂軍
• 申請（專利權）人: 綠亨科技集團股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙) 11210
• 代理人: 陳興強

本發明公開了一種檢測辣椒細胞質雄性不育恢復基因的分子標記。本發明的辣椒分子標記為SSR分子標記P06?319，以辣椒細胞質基因組DNA為模板，通過引物對P06?319F和P06?319R進行PCR擴增，獲得的DNA片段；其中，引物P06?319F和P06?319R均由單鏈DNA組成，P06?319F序列如SEQ ID NO.1所示，P06?319R序列如SEQ ID NO.2所示。本發明利用SSR標記多態性篩選獲得具有穩定多態性的分子標記及其引物對用于辣椒育性的快速鑒定及輔助育種。

技術領域

本發明涉及植物分子標記輔助技術領域，具體來說，涉及一種檢測辣椒細胞質雄性不育恢復基因的分子標記。

背景技術

辣椒(Capsicum annuum L.)為常異花授粉植物，以自交為主，有一定的天然雜交。培育辣椒新品種需要進行人工雜交育種，但由于辣椒花器官較小且雌雄同花，使得人工制種成本較高。利用辣椒雄性不育性培育一代雜種，可以省去人工去雄的過程，降低生產成本，極大提高一代雜種的種子純度，是迄今為止降低辣椒制種成本的最有效途徑之一。

辣椒雄性不育主要分為細胞核雄性不育型(Genic Male Sterility，GMS)、核質互作雄性不育型(Cytoplasmic Male Sterility，CMS)，其中細胞核雄性不育僅由核基因控制，而細胞質雄性不育是由細胞核基因與細胞質基因共同調控，相比于GMS，CMS可獲得100％的不育株，可以通過三系配套實現雜種優勢育種，擁有廣泛的應用前景。

辣椒CMS是由細胞質基因和細胞核基因共同調控的，其中細胞質基因能夠導致花粉無法產生或喪失功能，而細胞核中的恢復基因(restorer-of-fertility，Rf)可以抑制細胞質不育基因的功能。在實際生產中，利用辣椒細胞質雄性不育實現三系配套技術育種的關鍵之一是找到含有恢復基因Rf的恢復系材料。為此，國內外學者在Rf基因的定位及連鎖標記開發方面做了大量研究。開發了許多與Rf基因連鎖的分子標記，但在緊密連鎖程度及適用性上還有待提高。

當前，分子標記輔助育種在實際生產上的應用愈趨廣泛，已成為育種工作的重要輔助手段，大大縮短了育種周期。分子標記輔助育種效率的高低，關鍵在于獲得與性狀緊密連鎖且檢測方便的分子標記，因而，開發準確率高，檢測手段方便快捷的分子標記對于新品種選育具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種檢測辣椒細胞質雄性不育恢復基因的分子標記，其引物對及其檢測辣椒雄性不育恢復基因的方法，本發明的分子標記用于辣椒的輔助育種。

為達到上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種檢測辣椒細胞質雄性不育恢復基因的分子標記，以甜椒細胞質雄性不育系為試驗材料，構建F2定位群體，開發SSR標記并進行多態性篩選，獲得具有穩定多態性的P06-319標記，通過引物對P06-319F和P06-319R的PCR擴增獲得標記DNA片段，其中，P06-319F序列如SEQ ID NO.1所示，P06-319R序列如SEQ ID NO.2所示。

所述P06-319的獲得方法：

(1)構建定位群體：以甜椒細胞質雄性不育系22033B436及其恢復系22033C437為試驗材料，構建F2群體，對獲得包含600個單株的F2群體，單株統計花粉育性，采用改良CTAB法提取辣椒基因組DNA；

(2)開發SSR標記：對辣椒基因組6號染色體的核苷酸序列進行SSR位點的全序列掃描，開發覆蓋辣椒基因組6號染色體的SSR標記；

(3)篩選分子標記：利用親本22033B436，22033C437對開發的SSR標記進行多態性篩選，獲得在雙親間具有穩定多態性的分子標記P06-319；