[發(fā)明專利]一種提高牛性控凍精體外受精能力的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810433980.2
• 申請日: 2018-05-08
• 公開（公告）號: CN108642001B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙學(xué)明;朱化彬;郝海生;杜衛(wèi)華;龐云渭;劉巖;趙亞涵
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076;A61D19/02
• 代理公司: 北京智為時代知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發(fā)明提出了花青素和吡咯喹啉醌在提高性控凍精體外受精能力方面的用途，并提出了添加花青素和吡咯喹啉醌的洗精液和受精液。本發(fā)明在牛性控凍精解凍、獲能過程中，向洗精液和受精液中分別都加入花青素和吡咯喹啉醌，來處理牛性控凍精，而后進(jìn)行體外受精。結(jié)果表明，牛性控精液的卵裂率、囊胚率得到顯著性提高，并顯著超過了同頭公牛未分離凍精的體外受精效率，具有廣泛的應(yīng)用前景，值得推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及人工體外受精領(lǐng)域，具體涉及一種提高性控凍精體外受精能力的方法。

背景技術(shù)

在養(yǎng)殖業(yè)中，性別控制技術(shù)能夠使人們獲得預(yù)期性別的后代，進(jìn)而提高養(yǎng)殖業(yè)效益和育種進(jìn)度，因此該技術(shù)具有十分重要的意義。Johnson等在1989 年開發(fā)的精子流式細(xì)胞儀分離技術(shù)，已經(jīng)被成功用于奶牛X、Y精子的分離。目前，在奶牛人工授精過程中采用性控凍精，可控制母牛出生率在90％以上(Mikkola M,Andersson M,Taponen J.Transfer ofcattle embryos produced with sex-sorted semen results in impaired pregnancyrate and increased male calf mortality[J].Theriogenology,2015,84(7):1118-22.)。然而，青年牛采用奶牛性控凍精人工授精后受胎率約為40％，遠(yuǎn)低于常規(guī)凍精(70％左右)(郝海生, 趙明禮,朱化彬等.性控冷凍精液人工授精對青年奶牛繁殖性能的影響[J]. 畜牧與獸醫(yī),2016,48(8):52-54.)。同時，奶牛性控凍精用于體外受精時，卵裂率通常為40％、囊胚率為10％左右，而常規(guī)凍精體外受精后卵裂率通常在80％、30％以上(Zhao XM,Ren J J,Zhao S J,et al.Apoptosis-like events and in vitro fertilizationcapacity of sex-sorted bovine sperm[J].Reprod Domest Anim,2014,49(4):543-549.)。

研究表明，在性控精子分離過程中，需要經(jīng)過稀釋、染色、激光照射、冷凍等步驟，導(dǎo)致性控精子受精能力降低。因此，如何提高性控凍精活力和受精能力，已經(jīng)成為該領(lǐng)域的研究熱點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中性控凍精受精能力降低的問題，提供一種在性控凍精解凍、獲能過程中的保護(hù)措施，以保護(hù)性凍精免受ROS的影響，進(jìn)而提高牛性控凍精活力和體外受精的方法。本發(fā)明的一個目的是提供花青素和吡咯喹啉醌在提高性控凍精體外受精能力的用途。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種受精液，該受精液溶液中還含有花青素和吡咯喹啉醌。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種洗精液，該洗精精液溶液中還含有花青素和吡咯喹啉醌。

最后，本發(fā)明還提供一種利用含有花青素和吡咯喹啉醌的洗精液和受精液處理性控凍精，從而提高性控凍精體外受精能力的方法。

具體的說，本發(fā)明所述的性控凍精是牛性控凍精。

進(jìn)一步的，本發(fā)明所述的洗精液可采用本領(lǐng)域常用的各種洗精液加入花青素和吡咯喹啉醌。其中花青素的濃度為10^-5M-10^-1M，所述吡咯喹啉醌的濃度為50μM-5mM；

優(yōu)選的，所述花青素的濃度為10^-3M，所述吡咯喹啉醌的濃度為500μM。

進(jìn)一步優(yōu)選的，所述洗精液是BO液+3.38mg/mL咖啡因，還含有濃度為10^-5M-10^-1M的花青素，以及濃度為50μM-5mM的吡咯喹啉醌。

更進(jìn)一步優(yōu)選的，所述洗精液中花青素的濃度為10^-3M，所述吡咯喹啉醌的濃度為500μM。