[發明專利]一種引物、試劑盒及用途

有效

• 申請號: 201810432612.6
• 申請日: 2018-05-08
• 公開（公告）號: CN110241209B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發明（設計）人: 林云富
• 申請（專利權）人: 浙江品級基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京瑞盟知識產權代理有限公司 11300
• 代理人: 劉昕

1.一種引物在制備用于提高循環腫瘤DNA檢測靈敏度的方法的試劑中的用途，其特征在于，所述提高循環腫瘤DNA檢測靈敏度的方法包括：

合成所述引物作為分子條碼添加引物；

將所述分子條碼添加引物添加到循環腫瘤DNA中；

啟動DNA延伸反應；

消除未添加到循環腫瘤DNA中的游離的分子條碼添加引物；

用PCR方法特異擴增已經含有分子條碼添加引物的循環腫瘤DNA構建高通量序列文庫；

對高通量序列文庫進行測序，其中帶有相同分子條碼的序列被劃分在同一序列族中，對每一序列族進行分析，得出結果；

其中，消除未添加到循環腫瘤DNA中的游離的分子條碼添加引物的方法，是指向體系中引入抑制寡聚DNA，所述抑制寡聚DNA能夠與游離的分子條碼添加引物有效配對結合，使得游離的分子條碼添加引物的3’末端發生擴展；

所述引物包括：5’末端的17-25個核苷酸長的通用擴增引物序列、3’末端的17-25個核苷酸長的與靶向DNA基因組序列互配的特異性引物序列，以及位于5’端和3’端中間的12-16個核苷酸長的隨機分子條碼序列；

所述抑制寡聚DNA包含兩部分：3’末端的與所述分子條碼添加引物的3’末端完全互補的10-16個核苷酸長度的序列；5’末端的隨機的8-15個核苷酸長度的序列；所述隨機的8-15個核苷酸長度的序列與所述循環腫瘤DNA不匹配。

2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于：

將所述分子條碼添加引物添加到循環腫瘤DNA中的方法為：將分子條碼添加引物與循環腫瘤DNA進行混合，加入鎂離子和聚合酶以及聚合酶緩沖液，加熱后退火，使得所述分子條碼添加引物和靶向的循環腫瘤DNA分子有效配對結合。

3.根據權利要求2所述的用途，其特征在于：

所述分子條碼添加引物與循環腫瘤DNA的加入比例為100-100,000：1；所述鎂離子的濃度范圍為3-5mM。