[發明專利]一種干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法

在審

• 申請號: 201810430129.4
• 申請日: 2018-05-08
• 公開（公告）號: CN108559728A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 李順河
• 申請（專利權）人: 李順河
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/079
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發明公開了一種干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法,包括MSC基礎培養基、MSC添加物1、MSC添加物2、MSC添加物3，MSC完全培養基、氨基酸、維生素、鹽類、脂類、細胞因子和蛋白多肽，氨基酸中包含氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸，采用本培養基進行干細胞的培養是細胞的增長速度快，增長的面積更大，傳代十次仍然具有原始的表型一級較高的批間一致性，本發明具有出眾的擴增效率，穩定血清組織可以保證相同批次的一致性，在高密度下實現高效擴增，只需要較少的培養基，有效縮短干細胞的培養時間。

技術領域

本發明涉及干細胞培養技術領域，具體為一種干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法。

背景技術

諸多研究表明干細胞不僅可以自我更新，在條件合適的情況下能分化成其他功能細胞，因此干細胞有望成為治療人類疑難疾病的有效手段。然而，干細胞在正常成體組織中含量甚微，在體外如何快速擴增與培養干細胞培養是研究干細胞的作用機制及探索其在治療人類疾病治療方法的重要技術。

干細胞盡量含量甚微，但廣泛分布于哺乳動物的各個組織器官，這些組織或器官包括但不局限于骨髓、臍帶、脂肪組織、腦組織、視網膜、心臟、肝臟、肺以及皮膚等。大量研究表明，這些低含量的干細胞可在體外通過適當的方法進行進一步擴增，最常規的一種培養干細胞的培養基就是添加有胎牛血清的培養基。

發明內容

本發明的目的在于提供一種出眾的擴增效率，穩定血清組織可以保證相同批次的一致性，在高密度下實現高效擴增，只需要較少的培養基，有效縮短干細胞的培養時間的一種干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種干細胞培養基,所述干細胞培養基中包含MSC基礎培養基、MSC添加物1、MSC添加物2、MSC添加物3，MSC完全培養基、氨基酸、維生素、鹽類、脂類、細胞因子和蛋白多肽；所述MSC基礎培養基的體積為500ml液體，保存溫度為2-8℃，所述MSC添加物1的含量為60ml冰凍物，保存溫度為－20℃，所述MSC添加物2的含量為1ml的冰凍物，保存溫度為－20℃，所述MSC添加物3的含量為1ml的冰凍物，保存溫度為－20℃，所述MSC完全培養基的含量為562ml的液體，保存溫度為2-8℃；所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸；所述維生素包括生物素、氯化膽堿、D-泛酸鈣、葉酸、肌醇、煙酰胺、吡哆醇鹽酸鹽、核黃素、鹽酸硫氨。

優選的，所述MSC基礎培養基的體積為500ml液體，保存溫度為2-8℃，所述MSC添加物1的含量為60ml冰凍物，保存溫度為－20℃，所述MSC添加物2的含量為1ml的冰凍物，保存溫度為－20℃，所述MSC添加物3的含量為1ml的冰凍物，保存溫度為－20℃，所述MSC完全培養基的含量為562ml的液體，保存溫度為2-8℃。

優選的，所述培養基保存溫度為4℃。

優選的，所述干細胞培養基中包含血清。

優選的，所述鹽類包括碳酸氫鈉、氯化鈣、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鎂、氯化鈉。

優選的，一種干細胞培養基的干細胞培養方法，其特征在于：包括以下步驟：

A、提前將MSC添加物放到4℃的冰箱中過夜融化，或在室溫中進行融化，在融化好后立即將添加物放到培養基中；

B、在配置培養基時MSC基礎培養基的體積為500ml、MSC添加物1的含量為60ml、MSC添加物2的含量為1ml、MSC添加物3的含量為1ml、MSC完全培養基的含量為562ml、血清60ml；

C、依次將氨基酸、維生素、鹽類、脂類、蛋白多肽和細胞因子加入到培養基中；

D、將配置好的培養基避光保存在4℃的冰箱中。