[發明專利]一種抗阿茲海默病的轉基因小鼠與建立方法

在審

• 申請號: 201810429378.1
• 申請日: 2018-05-08
• 公開（公告）號: CN108546714A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 鄒珍友;沈琪瓊;梁勇;嚴露男;陳永峰;包兆勝;吳仲敏;趙志強;陳勇斌;王苗陽;方靜;唐筱穎;雷澄薇;姚銀寧;吳雨;袁帥斌;勞靖丹;朱清越;董倩倩;李瑤瑤;楊存梅;王懿;陳倩娜;王開;王義強;席淑賢;王文杭;吳建超;孟澤宇;王怡嵐;張娟麗;汪吉烽;盧夢萱;潘燕;范勇;梁家偉;黃開心;馬姍姍
• 申請（專利權）人: 臺州學院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發明公開了轉基因技術領域的一種抗阿茲海默病的轉基因小鼠與建立方法，該方法的具體步驟如下：S1：基因構建；S2：質粒構建；S3：雜交獲得純配子與動物；S4：轉基因鼠建系，本發明將Aβ₄₂中可螯合鐵的氨基酸殘基如Tyr、Glu、Asp、Met，將它們整合到一起成五遍重復序列合成了一種多肽5?HAYED，把結合鐵的氨基酸殘基含量提高，并且這些氨基酸含有更多電荷，具有較高的溶解性，以便進入腦組織后結合更多的鐵離子降低腦脊液內冗余的鐵，減少催生的自由基破壞腦組織，緩解阿茲海默病癥。

技術領域

本發明公開了一種抗阿茲海默病的轉基因小鼠與建立方法，具體為轉基因技術領域。

背景技術

老年癡呆癥(Alzheimer’s Disease，AD)是一種神經退行性疾病，因神經元大量壞死，導致腦萎縮而喪失記憶力，并伴有精神失常，語言障礙和人格變異。AD目前仍無有效方法治療。

研究表明，AD腦內鐵含量比正常腦高出約35％。生物體在新陳代謝生命活動過程中，會不斷生成一些氧化活性物質，如H2O2等，可與Fe2+離子發生Fenten’s反應，催生自由基。生成的·OH、O2˙-自由基可進一步與體內的生物大分子作用，破壞組織和細胞內的脂質，蛋白質等，導致細胞損傷，組織壞死。去除腦內冗余的過渡金屬，是治療AD的一個方向。曾有人用去鐵敏，地拉羅斯等口服藥用于去除血液和腦內過高的鐵以緩解病癥，但久服這些藥易引起腎衰和血液病，甚至死亡。

Aβ₄₂是腦內的一種含42個氨基酸殘基的多肽。其中的酪氨酸(Tyr，Y)、谷氨酸(Glu，E)、以及天冬氨酸(Asp，D)、甲硫氨酸(Met，M)殘基可與鐵離子結合而沉積，降低溶液內鐵的濃度，并減少自由基。這啟發我們可以用Aβ₄₂降低鐵和自由基緩解AD。然而天然的Aβ₄₂肽可結合鐵的氨基酸殘基只占全部氨基酸序列的1/3，而且溶解性小。為此，我們提出了一種抗阿茲海默病的轉基因小鼠與建立方法投入使用，以解決上述問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種抗阿茲海默病的轉基因小鼠與建立方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種抗阿茲海默病的轉基因小鼠與建立方法，該方法的具體步驟如下：

S1：基因構建：依據遺傳密碼子，五遍重復的HAYED氨基酸所對應的DNA序列為：catgcc tac cag gat cat gcc tac cag gat cat gcc tac cag gat cat gcc tac cag gatcat gcc tac cag gat；

為了能使之表達，需5’端添加起始密碼子“atg”，3’端添加終止密碼子“taa”，成為：Atg-cat gcc tac cag gat cat gcc tac cag gat cat gcc tac cag gat cat gcctac cag gat cat gcc tac cag gat-taa，并合成以上序列；

為了能將以上編碼五重復HAYED氨基酸序列的多肽的DNA序列重組到載體質粒內，在上述DNA序列5’端加上HIND III酶切序列“GGC A^AG CTT GCC”，3’末端加上Xba I酶切序列“TGC T^CT AGA GCA”；

將psisCAT6a質粒中的PDGF啟動子序列用HIND III和BamH酶切下來，與上述五重復編碼HAYED的DNA序列的擴增產物連接，這樣上述目標序列可借助PDGF啟動子啟動基因轉錄；

S2：質粒構建：再把以上含PDGF啟動子的目的DNA序列，在PCR擴增之后，用T4連接酶接入質粒含有篩選基因AMPr的質粒PCEP4的Xba I和BamH I之間，重組成pPD-5HAYED質粒；