[發明專利]一種抗BCMA的嵌合型抗原受體及其制備方法

在審

• 申請號: 201810428166.1
• 申請日: 2018-05-07
• 公開（公告）號: CN108441504A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 張同存;顧潮江;吳寒
• 申請（專利權）人: 武漢波睿達生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C12N15/867;C12N15/66
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 張濤

1.一種嵌合型抗原受體基因CD8α-VL-linker-VH-CD28TM-CD28-CD3ζ，其包含依次串聯的能夠結合抗原的胞外結構域、跨膜結構域和至少一個胞內結構域；所述胞外結構域由CD8信號肽、anti-BCMA輕鏈可變區(VL)、連接子(linker)、anti-BCMA重鏈可變區(VH)及CD8鉸鏈區(hinge)串聯構成；所述跨膜結構域為CD8跨膜區(TM)；所述胞內結構域由CD28胞內結構域及CD3ζ胞內結構域串聯構成。

2.如權利要求1所述的嵌合型抗原受體基因CD8α-VL-linker-VH-CD8hingeCD28TM-CD28-CD3ζ，其特征在于，所述CD3ζ胞內結構域為CD3ζ細胞毒性功能區。

3.一種權利要求1所述的嵌合型抗原受體基因CD8α-VL-linker-VH-CD8hinge-CD28TM-CD28-CD3ζ的制備方法，其特征在于，包括：將CD8信號肽、anti-BCMA輕鏈可變區(VL)、連接子(linker)、anti-BCMA重鏈可變區(VH)、CD8鉸鏈區CD8跨膜區(TM)、CD28胞內結構域及CD3zeta胞內結構域通過基因合成技術直接合成。

4.一種含有權利要求1所述的PLVX-EF1α-IRES-puro慢病毒表達載體的重組質粒PLVX-BCMA-01。

5.一種權利要求4所述的重組質粒PLVX-BCMA-01的制備方法，其特征在于，包括：將上述嵌合型抗原受體基因CD8α-VL-linker-VH-CD8hinge-CD28TM-CD28-CD3ζ構利用重疊PCR和限制性酶切連接進PLVX-EF1α-IRES-puro慢病毒表達載體上，以形成重組質粒PLVX-BCMA-01。

6.一種抗BCMA的嵌合型抗原受體，其特征在于，包括依次串聯的scFv抗體(單鏈抗體)、CD8hinge鉸鏈區、CD8跨膜區(TM)、CD28胞內結構域(ICD)及CD3ζ胞內結構域。

7.一種權利要求6所述的抗BCMA的嵌合型抗原受體的制備方法，其特征在于，包括：

1)提取PLVX-BCMA-01質粒和PBRD-VSVG-01及PBRD-GAG-01輔助質粒，按一定比例混合(質量比5：3：2)，共轉染293T細胞72h后，收集含有病毒的細胞培養上清，4000rpm離心，上清經0.22μm濾器過濾后，30000g高速離心，棄上清，沉淀用4℃預冷的PBS重懸(在冰上操作)即獲得病毒濃縮液；

2)取健康人新鮮血液，分離外周血單核細胞，對細胞進行磁珠標記，并分離純化出T淋巴細胞；對純化后的T淋巴細胞進行激活及增殖；

3)收集激活的T淋巴細胞，重懸，將慢病毒稀釋，感染活化的T淋巴細胞，并加入聚凝胺，離心，孵育過夜。