[發明專利]一種以煙草花葉病毒為模板的微傳感器可控陣列化制備方法

有效

• 申請號: 201810426187.X
• 申請日: 2018-05-07
• 公開（公告）號: CN108956983B
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 馬炳和;羅劍;李博源;苑偉政;王冠;鄧進軍;畢珍
• 申請（專利權）人: 西北工業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 西北工業大學專利中心 61204
• 代理人: 呂湘連

1.一種以煙草花葉病毒為模板的微傳感器可控陣列化制備方法，包括下列步驟：

步驟一：利用噬菌體展示技術得到與特定功能納米粒子結合的多肽分子及其對應的基因序列：

A:將特定功能納米粒子分散液與噬菌體培養液混合培養數小時后，離心得到沉淀，去除上層清液，并沖洗沉淀，去除未吸附的噬菌體；

B:對吸附特定功能納米粒子的噬菌體進行洗脫處理，并通過大腸桿菌對洗脫得到的噬菌體進行富集培養；

C:對富集培養的噬菌體進行高通量測序，最終得到可以與特定功能納米粒子結合的多肽對應的基因序列；

步驟二：利用重疊延伸PCR技術對煙草花葉病毒進行基因修飾：

A:根據步驟一得到的基因序列，設計重疊延伸PCR擴增所需引物；

B:利用重疊延伸PCR技術，在煙草花葉病毒基因組特定位點插入步驟一中得到的與特定功能納米粒子結合的多肽的基因序列及編碼半胱氨酸(Cys)的基因序列，得到改良型煙草花葉病毒；

C:將得到的改良型煙草花葉病毒進行富集培養，并配制成相應的緩沖溶液；

步驟三：基底預處理：在清洗干凈的玻璃基底上旋涂PDMS層；

步驟四：基底的陣列化處理：

A:將步驟三得到的基底置于濺射儀中，在表面濺射一層金(Au)層，得到第一復合基片；

B:將第一復合基片進行勻膠處理，得到第二復合基片；

C:將第二復合基片安裝在熱烘板上進行軟烘,得到第三復合基片；

D:將第三復合基片安裝在光刻機中，并在其上安裝具有陣列化的掩模，將第三復合基片在紫外光中曝光，得到第四復合基片；

E:將第四復合基片置于顯影液中浸泡后取出，用去離子水沖洗定影，第四復合基片表面非陣列化圖形區域的光刻膠被移除，暴露出金層，得到第五復合基片；

F:將第五復合基片置于金刻蝕液中浸泡后取出，用去離子水沖洗，去除暴露的金層，得到第六復合基片；

G:將第六復合基片置于丙酮中浸泡后取出，用去離子水沖洗，得到第七復合基片，即陣列化的金基底層；

步驟五：煙草花葉病毒的陣列化：

A:將步驟四得到的金層基底置于步驟二得到的煙草花葉病毒的緩沖溶液中浸泡，在搖床上振蕩培養，使煙草花葉病毒底端蛋白的半胱氨酸與金納米粒子充分結合，形成穩定的Au-S鍵；

B:取出上述基底，并用去離子水反復沖洗數次，去除未吸附的煙草花葉病毒，得到陣列化的煙草花葉病毒基底層；

步驟六：功能性微傳感器的陣列化：

A:配制功能性納米粒子對應的溶膠溶液；

B:將步驟五得到的陣列化煙草花葉病毒基底置于功能納米粒子的溶膠溶液中，在搖床上振蕩培養至少12h，使煙草花葉病毒表面蛋白引入的特異性多肽與功能性納米粒子溶膠分子充分結合并結晶生長；

C：取出基底，用去離子水沖洗，去除多余溶膠溶液，得到功能性微傳感器陣列層。