[發明專利]寡糖的大規模酶合成的方法有效
| 申請號： | 201810425113.4 | 申請日： | 2013-08-20 |
| 公開（公告）號： | CN108588151B | 公開（公告）日： | 2022-05-13 |
| 發明（設計）人： | 翁啟惠;吳宗益;蔡宗義 | 申請（專利權）人： | 臺灣地區“中央研究院” |
| 主分類號： | C12P19/26 | 分類號： | C12P19/26;C12P19/18 |
| 代理公司： | 上海專利商標事務所有限公司 31100 | 代理人： | 陳靜 |
| 地址： | 中國臺灣臺北市*** | 國省代碼： | 臺灣;71 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 寡糖 大規模 合成 方法 | ||
1.一種以酶性方式合成唾液酸-Gb5寡糖的方法，其特征在于，包含：
(i)在CMP-Neu5Ac再生酶組存在下，自Neu5Ac生成CMP-Neu5Ac，其中該CMP-Neu5Ac再生酶組由胞苷單磷酸激酶、CMP-唾液酸合成酶、丙酮酸激酶及焦磷酸化酶所組成；
(ii)在UDP-Gal及β-1,3-半乳糖轉移酶存在下，將Globo四糖-OR1A(Gb4-OR1A)轉換為Globo五糖-OR1A(Gb5-OR1A)；及
(iii)在CMP-Neu5Ac及α-2,3-唾液酸轉移酶存在下，將Gb5-OR1A轉換為唾液酸-Gb5-OR1A，
其中(i)及(iii)是在唾液酸-Gb5-合成反應混合物中進行，該反應混合物由Neu5Ac、CTP、磷酸烯醇丙酮酸、Gb5-OR1A、α-2,3-唾液酸轉移酶、ATP、緩沖液、MgCl2及CMP-Neu5Ac再生酶組組成，
其中R1A為氫、經取代或未經取代的烷基、經取代或未經取代的烯基、經取代或未經取代的炔基、經取代或未經取代的環碳基、經取代或未經取代的雜環基、經取代或未經取代的芳基、經取代或未經取代的雜芳基或氧保護基團、生物素或神經酰胺，
其中該方法是以一鍋法來實施，無純化中間物的步驟，
其中該α-2,3-唾液酸轉移酶是來自海洋細菌、該胞苷單磷酸激酶是來自大腸桿菌、該CMP-唾液酸合成酶是來自多殺性巴氏桿菌、該丙酮酸激酶是來自大腸桿菌、和該焦磷酸化酶是來自大腸桿菌。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，進一步包含分離唾液酸-Gb5-OR1A。
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