[發明專利]生物活性重組人HNP-1蛋白的制備

有效

• 申請號: 201810421009.8
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN110438140B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 徐平;謝琦;武軍駐;王銀;魏威;肖偉弟;王一豪;常蕾;高慧英;劉艷紅
• 申請（專利權）人: 北京譜峰源生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K14/47;C07K1/34
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

本發明涉及一種人HNP?1蛋白的制備方法，構建并使用大腸桿菌表達體系制備具有生物活性的成熟人HNP?1蛋白,這是本領域首次利用原核體系表達出具有活性的HNP?1蛋白。

技術領域

本發明涉及基因工程，具體涉及利用原核表達體系表達有生物活性的人成熟HNP-1蛋白(人α-防御素-1)的方法。

背景技術

防御素是廣泛存在于動物、植物及昆蟲體內的一類小分子短肽。它能抵御細菌、真菌或病毒等微生物入侵，是生物體免疫系統的組成部分。瑞典科學家Hulmark等1975年從惜古比天蠶(Hyatophora Cecropins)蛹中誘導分離出了第一個殺菌肽Cecropin，開辟了這個新的領域(Hulmark D.Insect immunity:purification and properties of threeinducible bactericidal proteins from hemolymph of immunized pupae ofHyalophora cecropia.European Journal of Biochemistry,1980,106:7～16)。1980年，美國Robert Lehrer實驗室從兔肺巨噬細胞中首先分離得到了一種類似的陽離子性極強的小分子抗菌肽，定名為防御素(Lehrer,R.I.Lu,W.alpha-Defensins in human innateimmunity.Immunological reviews,2012,245:84～112,doi:10.1111/j.1600-065X.2011.01082.x)。

防御素通常由29～54個氨基酸組成，包括6～8個保守半胱氨酸，可通過半胱氨酸分子內二硫鍵使肽環形成反向平行的β片狀或α螺旋結構。根據來源的不同，防御素可分為動物防御素、植物防御素和昆蟲防御素；根據分子結構特征，動物防御素又可分為α-防御素、β-防御素和θ-防御素3種。

α-防御素最早從兔肺巨噬細胞中分離得到。這類防御素主要存在于哺乳動物有關組織和細胞中，由29～35個氨基酸組成,富含精氨酸和非常保守的6個半胱氨酸以Cys-l-Cys-6、Cys-2-Cys-4、Cys-3-Cys-5方式形成3對分子內二硫鍵,其中Cys-l-Cys-6對二硫鍵連接N端和C端的半胱氨酸形成圓形分子大環。已知兔的中性粒細胞中含有6種α-防御素,即RabNP-1、-2、-3a、-3b、-4、-5,這些防御素總量占細胞蛋白質總量的15％～20％。與兔類似，α-防御素-1(α-defensin-1，HNP-1)是人中性粒細胞的主要防御素分子。這類防御素主要存在于人中性粒細胞的溶酶體顆粒內，是迄今發現含量最多、活性最強的殺菌分子，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌以及腺病毒、流感病毒、艾滋病毒等均有很強的殺傷活性(Selsted,M.E.Ouellette,A.J.Mammalian defensins in the antimicrobial immuneresponse.Nature immunology,2005,6:551-557,doi:10.1038/ni1206；Lehrer,R.I.Lu,W.alpha-Defensins in human innate immunity.Immunological reviews,2012,245:84-112,doi:10.1111/j.1600-065X.2011.01082.x)。如此廣譜的抗性可能是生物長期進化過程中與疾病斗爭的結果。其抗微生物的作用機理可以分為抗菌作用、抗病毒的作用、細胞毒作用、免疫調節功能四個方面。