[發明專利]從茶葉中制備槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法

有效

• 申請號: 201810418025.1
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN108864225B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 方舟滔;宋楚君;須海榮;葉儉慧;陸建良
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07H17/07
• 分類號: C07H17/07;C07H1/08
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發明公開了一種從茶葉中制備槲皮素?3?O?葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法，包括以下步驟：(1)、將茶葉加水浸提，過濾，得茶葉提取液；(2)、將茶葉提取液進行聚酰胺柱色譜分離，得到粗產品溶液；梯度洗脫條件為：水→15％甲醇水溶液→粗品提取溶劑→純甲醇；粗品提取溶劑洗脫收集得到的洗脫液經濃縮后即得到粗產品溶液；(3)、將粗產品溶液進行制備色譜分離，收集組分，得到槲皮素?3?O?葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷溶液；(4)將步驟(3)中所得到的溶液經減壓濃縮，冷凍干燥，得到槲皮素?3?O?葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷。采用本發明的方法可從茶葉中大量分離純化得到該化合物。

技術領域

本發明涉及茶葉中的有效成分的提取制備方法，具體涉及一種從茶葉中制備槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法，屬于化合物制備技術領域。

背景技術

茶樹是多年生常綠葉用作物。在茶的鮮葉中，水分約占75％，干物質為25％左右。到目前為止，茶葉中經分離、鑒定的已知化合物有1400多種，其中茶多酚、氨基酸、生物堿是影響茶葉品質的三類重要物質。茶多酚類亦稱“茶鞣質”、“茶單寧”，是一類存在于茶樹中的多元酚的混合物，主要包括兒茶素類、黃酮及黃酮醇類、花青素及花白素類和酚酸及縮酚酸類。其中，黃酮及黃酮醇類是一類廣泛存在自然界的黃色色素，在干茶中的含量約為3-4％，帶苦澀味，對綠茶湯色的影響較大。

自從20世紀50年代Nakabayashi等人首次在茶葉中發現了黃酮及其苷類物質，針對茶葉中黃酮類物質的研究就此展開。早期，茶葉中黃酮類化合物的分離主要使用紙層析(PC)、薄層層析(TLC)等手段。液相色譜、質譜、光電二極管陣列檢測、核磁共振等檢測技術的發展和在茶葉領域的應用使茶葉黃酮分離、檢測的同時進行成為了一種可能。隨后，超高效液相色譜的應用使茶葉中黃酮類物質的分離邁上了更快、更好的新臺階。但是由于茶葉中黃酮類物質的含量以及分離手段的局限性，目前尚未得到茶葉中全部黃酮醇苷類物質的標準品，這對茶葉中黃酮類物質的進一步研究造成了一定的困難。

槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷，即，槲皮素-3-O-[β-葡萄糖-(1→3)-α-鼠李糖-(1→6)-β葡萄糖]，在已經公開的《Flavonol Glycosides in Tea-Kaempferol andQuercetin Rhamnodiglucosides》中有明確告知。

槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷，目前現有的制備方法為：稱取20g茶葉用純甲醇以1:50茶水比浸提一次(15min,40℃)，70％甲醇溶液以1：20茶水比浸提兩次。上清液蒸發濃縮至100mL，并用去離子水定容到200mL。將茶湯用聚酰胺柱(20cm×3cm id)層析進行預處理。聚酰胺事先用純甲醇溶脹，并用500mL去離子水沖洗。茶湯上樣50mL，首先用250mL去離子水洗去糖類和礦物質，棄去洗脫液；再用500mL純甲醇洗脫黃酮醇苷，將洗脫液濃縮至近足干，轉移后用水定容至10mL。使用Nucleosil C18 5um的制備色譜柱，采用0.2％乙酸(A相)和純乙腈(B相)作為流動相，洗脫方法如下：(1)A:B＝85:15,12ml/min；(2)A:B＝87:13,16ml/min；(3)A:B＝82:18,12ml/min，收集對應時間產物，真空凍干得到黃酮醇苷純品粉末。

上述方法需要使用制備色譜進行3次分離后才能得到槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷純品，耗時長；不利于大量制備。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種從茶葉中制備槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種從茶葉中制備槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法，包括以下步驟：

(1)、將茶葉加水浸提，過濾，得茶葉提取液；

(2)、將茶葉提取液進行聚酰胺柱色譜分離，得到粗產品溶液；