[發明專利]用于檢測貓血清淀粉樣蛋白A的免疫熒光層析檢測卡與制備方法

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• 申請號: 201810417740.3
• 申請日: 2018-05-04
• 公開（公告）號: CN108387748A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 湯永平;梁展鵬
• 申請（專利權）人: 廣州敏捷生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/558
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

本發明公開了一種用于檢測貓血清淀粉樣蛋白A的免疫熒光層析檢測卡及其制備方法；旨在提供一種靈敏度高，檢測結果可靠的用于檢測貓血清淀粉樣蛋白A的免疫熒光層析檢測卡；其技術要點包括底板，在底板上依次銜接有樣品墊、結合墊、硝酸纖維膜和吸水墊，所述結合墊上設有熒光微球標記的SAA單克隆抗體和熒光微球標記的羊抗雞IgY，所述的硝酸纖維膜設有一條包被SAA單克隆抗體的檢測T線，以及一條包被雞IgY的質控C線；屬于動物疫病檢測領域。

技術領域

本發明公開了一種免疫熒光層析檢測卡，具體地說，是一種用于檢測貓血清淀粉樣蛋白A的免疫熒光層析檢測卡，本發明還公開了該免疫熒光層析檢測卡的制備方法。

背景技術

血清淀粉樣蛋白A(SAA)是存在于許多物種中的一種主要的急相蛋白，包括人、犬、貓和馬等。一旦機體受到感染、創傷及外科手術等引起炎癥刺激后，SAA的濃度會在數小時內迅速升高；同時SAA半衰期非常短，隨著炎癥源的清除，SAA的濃度水平又會迅速下降。

SAA的基因序列在脊椎動物中高度保守。人SAA含有104個氨基酸。而貓的SAA相當于在人的SAA分子中間區域插入了額外的111個氨基酸序列。

SAA是一種靈敏的炎癥和組織損傷標志物。在獸醫學中，測定血液中的SAA可以用于診斷亞臨床炎癥、監控動物炎癥和感染的治療效果以及監控病患外科手術進程。

現有的SAA檢測方法主要是酶聯免疫法，由于酶聯免疫測定周期長，不能在自動生化分析儀上使用，不適合急診的快速檢測，是SAA檢測試劑盒普及的弊端，而膠乳增強免疫比濁法操作簡單，經濟，可以在絕大多數醫院的自動生化分析儀上使用，特別是急診能實現快速定量檢測，其基本原理是：將抗體包被在膠乳顆粒上，與相應抗原發生免疫反應后，形成聚集顆粒，在一定波長下，通過測定聚集物所產生的濁度，即可測出標本中被檢物含量。

中國專利ZL 201210575603.5一種快速定量檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒，所述試劑盒包括由SAA單抗包被于膠體金制成的凍干抗SAA免疫膠體金、反應板、樣品稀釋液、凍干膠體金復溶液、洗滌液和封閉液；所述反應板為膠體金檢測板，反應板上的硝基纖維膜由針對另一反應決定簇的另一純化SAA單抗或多抗包被；但是該方法采用免疫滲濾法，需要溶解抗SAA金標液凍干品并稀釋、稀釋樣本、滴加封閉液、滲入、滴加稀釋好的抗SAA金標液、加洗滌液、最后檢測等一系列步驟，非常繁瑣費時，不利于疾病早期快速診斷與治療。另外該專利采用膠體金作為示蹤物，免疫標記物依靠靜電吸附，存在靈敏度較低、難以定量、重復性和穩定性較差等缺陷，無法完全滿足臨床的檢測需求。

中國專利ZL201510497125.4公開了一種人血清淀粉樣蛋白A檢測試劑盒，所述的試劑盒包括試劑R1、試劑R2，所述的試劑R1為適當的緩沖液；所述的試劑R2是用人血清淀粉樣蛋白A抗體致敏聚苯乙烯膠乳顆粒、置于適當的緩沖液中組成，但是該方法使用到兩種緩沖液，液體需要冷藏，檢測時需要采用日立7080型等自動生化分析儀，體積比較龐大，不合適現場檢測，不能對進行進行盡早的診斷與治療。

中國專利ZL201511020151.4公開了一種血清淀粉樣蛋白A的熒光免疫層析檢測試劑盒，包括試劑盒體以及稀釋液瓶，所述試劑盒體包括免疫層析檢測卡，所述免疫層析檢測卡包括PVC襯板以及固定在PVC襯板上的樣品墊、探針固定墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述樣品墊搭接在探針固定墊上，所述探針固定墊和吸水紙分別搭接在所述硝酸纖維素膜兩側，所述硝酸纖維素膜上設置有檢測線和控制線，所述檢測線內包被有血清淀粉樣蛋白A單克隆抗體，所述控制線內包被有羊抗兔IgG；所述探針固定墊由血清淀粉樣蛋白A單克隆抗體熒光膠乳微粒和羊抗兔IgG熒光膠乳微粒組成的混合熒光膠乳微粒干燥制得；但是該方法存在下述缺點：熒光乳膠微粒需要先與白蛋白進行偶聯，然后再與血清淀粉樣蛋白A單克隆抗體進行偶聯，雖然可以減少檢測過程中雙夾心結構的空間阻力，同時也增加了偶聯的步驟，可能影響檢測的重復性。

發明內容