[發(fā)明專利]一種培養(yǎng)斜生柵藻藻種生產(chǎn)天然類胡蘿卜素的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810413364.0
• 申請(qǐng)日: 2018-05-03
• 公開（公告）號(hào): CN108660176A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 凌善鋒;韓佳祥;蔡劉新;張贏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 荊楚理工學(xué)院
• 主分類號(hào): C12P23/00
• 分類號(hào): C12P23/00;C12R1/89
• 代理公司: 荊門市首創(chuàng)專利事務(wù)所 42107
• 代理人: 裴作平

1.一種培養(yǎng)斜生柵藻藻種生產(chǎn)天然類胡蘿卜素的方法，其特征在于包括以下步驟：

S1、黃漿水預(yù)處理：將豆制品制作過程中的黃漿水收集后，使用5-7層紗布過濾，過濾后調(diào)整黃漿水濾液的 pH 值至 7.5-8.0 ；

S2、制取富硒黃漿水培養(yǎng)基：在S1制得的黃漿水濾液中添加質(zhì)量體積比為8%-12% 的富硒馬鈴薯汁和質(zhì)量體積比為25%-35%的濃縮富硒泉水，黃漿水濾液、富硒馬鈴薯汁和濃縮富硒泉水的質(zhì)量比為7:2:1，然后采用 121℃、30min高壓蒸汽滅菌法滅菌，制得富硒黃漿水培養(yǎng)基；

S3、活化斜生柵藻藻種：用S2中獲得的富硒黃漿水培養(yǎng)基培養(yǎng)活化斜生柵藻藻種；

S4、藻種初步培養(yǎng)：在富硒黃漿水培養(yǎng)基中接種S3中活化后的斜生柵藻藻種,初始接種密度是0.95×10⁶個(gè)/mL，使用紅光燈管照射培養(yǎng)，強(qiáng)度為1500-2000lux, 加入茉莉酸甲酯，25℃靜止培養(yǎng),直至斜生柵藻培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；

S5、藻種誘導(dǎo)培養(yǎng)：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的斜生柵藻的培養(yǎng)溫度提高到32-37℃，在藍(lán)光燈管照射下, 提高光照強(qiáng)度到7500-7700lux進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，光暗周期為21h：3h的培養(yǎng)架中培養(yǎng)，添加葡萄糖和木糖到培養(yǎng)基中使葡萄糖和木糖濃度分別達(dá)到8-12g/L和27.0-37.0g/L，每天震蕩搖瓶一次,培養(yǎng)15-20天；

S6、破壞葉綠素和藻體細(xì)胞破壁：取出S5中藻液離心去上清，收集藻體沉淀，在藻體沉淀中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%-4%的KOH溶液和18%-20%的甲醇溶液破壞葉綠素8-10min，離心收集沉淀，溶于滅菌水中，然后進(jìn)行低溫高壓均質(zhì)破壁處理或超聲波破壁處理得到破壁后的藻體細(xì)胞；

S7、類胡蘿卜素萃取：將S6中破壁后的藻體細(xì)胞中加入冰浴過的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%-90%的乙醇溶液進(jìn)行類胡蘿卜素提取，料液比為 1:4.2，料液比單位為mg/mL，提取時(shí)間為冰浴40-50min，重復(fù)提取次數(shù) 2-3 次，直至藻體變白，過濾并收集類胡蘿卜素提取液；

S8、類胡蘿卜素干品制備：將S7中的類胡蘿卜素提取液經(jīng)過蒸去溶劑、濃縮、結(jié)晶、真空干燥后得到類胡蘿卜素干品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培養(yǎng)斜生柵藻藻種生產(chǎn)天然類胡蘿卜素的方法，其特征在于斜生柵藻藻種的含蝦青素為0.09%，由紫外輻射和亞硝基胍復(fù)合脅迫的方法培育而成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培養(yǎng)斜生柵藻藻種生產(chǎn)天然類胡蘿卜素的方法，其特征在于富硒馬鈴薯汁的含硒量為1.75-1.95mg/kg，濃縮富硒泉水含硒量為20-24mg/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培養(yǎng)斜生柵藻藻種生產(chǎn)天然類胡蘿卜素的方法，其特征在于紅光燈管為左右兩側(cè)給光，兩側(cè)紅光燈管與藻液之間的距離均為12-14cm，富硒黃漿水培養(yǎng)基中茉莉酸甲酯濃度在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期前3天由3.5mg/mL提高到5.25mg/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培養(yǎng)斜生柵藻藻種生產(chǎn)天然類胡蘿卜素的方法，其特征在于藍(lán)光燈管為頂部給光，頂部與藻液之間的距離為32-34cm，脅迫誘導(dǎo)類胡蘿卜素。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種培養(yǎng)斜生柵藻藻種生產(chǎn)天然類胡蘿卜素的方法，其特征在于低溫高壓均質(zhì)破壁的條件為:9℃,70MPa,料液比為 1:5.5，料液比單位為mg/mL，循環(huán)2-3次。