[發明專利]一種酸性脂肪酶基因LipC及其編碼的酸性脂肪酶的制備方法

有效

• 申請號: 201810412247.2
• 申請日: 2018-05-03
• 公開（公告）號: CN108570475B
• 公開（公告）日: 2020-07-21
• 發明（設計）人: 朱婧;王青艷;潘勤春;秦艷;李億;潘麗霞;申乃坤;梁戈
• 申請（專利權）人: 廣西科學院
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/20;C12N15/70;C12N1/21
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種酸性脂肪酶基因LipC及其編碼的酸性脂肪酶的制備方法，屬于基因工程技術領域。所述酸性脂肪酶基因LipC的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，利用包括酸性脂肪酶基因LipC的重組表達菌株制備酸性脂肪酶的方法，包括以下步驟：1)活化培養重組菌株C?OB₅獲得種子液；2)將所述種子液接種于自動誘導發酵培養基中依次進行高溶氧發酵和低溶氧發酵后，收集菌體細胞，破胞后獲得酸性脂肪酶。本發明提供的酸性脂肪酶基因LipC編碼的酸性脂肪酶的最適反應pH范圍為2.5～4，最適反應溫度范圍為45～60℃，耐熱性和耐酸性好，應用范圍廣。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，尤其涉及一種酸性脂肪酶基因LipC及其編碼的酸性脂肪酶的制備方法。

背景技術

脂肪酶又稱三酰基甘油水解酶(EC 3.1.1.3)，是一類能在油水界面或非水相系統中催化酯類物質發生水解、酯化、酯交換以及合成等化學反應的生物催化劑，具有化學選擇性、立體選擇性和底物專一性等特點，是當代酶工業最受矚目的酶種之一。自然界中的許多動物、植物、微生物均能產脂肪酶。其中，微生物脂肪酶催化反應條件溫和，并且不會導致環境污染，且易于培養，可通過育種手段提高產酶量，且有比動植物脂肪酶更廣的作用溫度、作用pH值和底物特異性，因而，從微生物代謝產物中尋求脂肪酶成為科研工作者的研究熱點。

近年來，人們對脂肪酶耐熱、耐酸等酶學特性提出了新的要求，且已成為國內外一個新的研究熱點。酸性脂肪酶廣泛地應用于食品風味改進、油脂水解與改性、皮革脫脂、藥物修飾、生物柴油等工業領域，但目前多數脂肪酶的最適反應pH值在6～9之間，少數脂肪酶耐受的最低pH值為5左右；多數耐受溫度較高的脂肪酶耐酸性差，在生產中由于耐熱或耐酸性較差而失活，或酶作用的最適溫度和pH值不在生產工藝要求范圍內而受限制。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種耐熱性、耐酸性良好的脂肪酶基因LipC及其編碼的酸性脂肪酶的制備方法。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：一種酸性脂肪酶基因LipC，所述酸性脂肪酶基因LipC具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

本發明提供了所述基因LipC編碼的酸性脂肪酶，所述酸性脂肪酶具有如SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。

本發明提供了包括上述基因LipC的重組表達載體，所述重組載體包括原始表達載體和基因LipC。

優選的，所述重組表達載體還包括折疊酶基因LifB，所述折疊酶基因LifB的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

優選的，所述原始表達載體為pETDUET-1。

本發明提供了一株包括所述重組表達載體的重組菌株C-OB₅，所述重組菌株C-OB₅的保藏編號為GCMCC No.14107。

本發明還提供了所述的重組表達菌株制備酸性脂肪酶的方法，包括以下步驟：1)活化培養重組菌株C-OB₅獲得種子液；2)將所述種子液接種于自動誘導發酵培養基中依次進行高溶氧發酵和低溶氧發酵后，收集菌體細胞，破胞后獲得酸性脂肪酶；所述高溶氧發酵的溫度為29～31℃，攪拌轉速為120～180rpm，通氣量為480～520L/h；所述低溶氧發酵的溫度為24～26℃，攪拌轉速為220～280rpm，所述低溶氧發酵過程不通氣。

優選的，所述高溶氧發酵的時間為4～8h；所述低溶氧發酵的時間為32～40h。