[發(fā)明專利]利用重組水泡性口炎病毒構(gòu)建預(yù)防豬流行性腹瀉病毒疫苗有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810412129.1 | 申請日： | 2018-05-02 |
| 公開（公告）號： | CN108743934B | 公開（公告）日： | 2021-10-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 孫濤;方心葵;柯勇 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海交通大學(xué) |
| 主分類號： | A61K39/295 | 分類號： | A61K39/295;A61K39/215;A61K39/205;A61P31/14;C12N15/863;C07K14/18 |
| 代理公司： | 上海漢聲知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236 | 代理人： | 莊文莉 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 利用 重組 水泡 口炎 病毒 構(gòu)建 預(yù)防 流行性 腹瀉 疫苗 | ||
本發(fā)明公開了利用重組水泡性口炎病毒(VSV)構(gòu)建預(yù)防豬流行性腹瀉病毒(PEDV)疫苗；包括：借助基質(zhì)蛋白(Matrix,M)三個不同氨基酸位點(diǎn)發(fā)生突變的高度弱化的VSV(VSVMT)表達(dá)PEDV2012年上海株保護(hù)性抗原S蛋白來制備得到的預(yù)防PEDV的新型疫苗。該重組病毒體外復(fù)制滴度可接近109TCID50/ml；在豬體內(nèi)，該新型疫苗可高效誘導(dǎo)中和保護(hù)性抗體，同時，鑒于以VSV為平臺構(gòu)建的重組疫苗具備快速激活動物機(jī)體免疫保護(hù)力的特點(diǎn)，表達(dá)PEDV保護(hù)性抗原的VSV疫苗可成為有效預(yù)防豬流行性腹瀉病毒的應(yīng)急免疫疫苗。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種利用重組水泡性口炎病毒(VSV)構(gòu)建預(yù)防豬流行性腹瀉病毒疫苗。
背景技術(shù)
豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的以腹瀉、嘔吐、脫水和對哺乳仔豬高致死率為主要特征的一種高度接觸性腸道傳染病(Pensaert et al.，1978)，PEDV是一種動物冠狀病毒，該病毒可致各年齡段豬感染，但仔豬發(fā)病率通常為100％，母豬為15％～90％，其中，該病毒對新生仔豬致死率可達(dá)50％以上，2011年以來，PEDV在我國的大范圍流行給養(yǎng)殖業(yè)造成了極大經(jīng)濟(jì)損失。PEDV所致病程急，傳播速度快，因此及時針對疫區(qū)和周邊地區(qū)的豬群尤其是初生仔豬和待產(chǎn)母豬進(jìn)行緊急預(yù)防接種，使之快速產(chǎn)生免疫保護(hù)力，對于控制疫情蔓延，降低仔豬死亡率極為關(guān)鍵。雖然PEDV疫苗已在國內(nèi)廣泛應(yīng)用，但是PEDV在國內(nèi)各地豬場的流行仍較普遍。
目前預(yù)防PEDV所使用的商品化疫苗存在以下缺點(diǎn)：
1、主要為滅活疫苗，需多次接種動物，形成免疫保護(hù)力較慢，不適合在疫情出現(xiàn)時應(yīng)急接種之用；
2、滅活苗的另一個缺點(diǎn)是無法有效激發(fā)宿主產(chǎn)生特異性CTL及粘膜免疫應(yīng)答。利用PEDV減毒活疫苗是克服這些困難的方法之一，但由于冠狀病毒基因可在自然條件發(fā)生重組，因此難以保證其使用的安全性，歐美國家禁止使用減毒活疫苗預(yù)防PEDV；
3、目前PEDV的制備主要通過Vero細(xì)胞體外培養(yǎng)獲得，復(fù)制滴度較低(約106-107TCID50/ml)，細(xì)胞培養(yǎng)液需加入一定量的胰酶才能維持病毒體外擴(kuò)增，這在一定程度上限制了該病毒的大規(guī)模制備。
鑒于現(xiàn)有疫苗存在的問題，急需研究新型的PEDV疫苗。
重組水泡性口炎病毒(VSV)作為疫苗載體具有獨(dú)特優(yōu)勢，已經(jīng)得到很好應(yīng)用。借助基因工程減毒病毒載體表達(dá)外源抗原是研制新型疫苗的一種有效方式，其中重組水泡性口炎病毒(VSV)已在人用應(yīng)急疫苗研制和應(yīng)用上取得突破，新近的報道表明，利用重組水泡性口炎病毒(VSV)為載體制備的Ebola病毒應(yīng)急疫苗，可在3-5天內(nèi)激發(fā)靈長動物體內(nèi)有效免疫保護(hù)力，免疫動物可經(jīng)受住致死劑量病毒的攻擊，該疫苗即將完成人體實(shí)驗，投入臨床應(yīng)用。
VSV作為疫苗載體的主要優(yōu)點(diǎn)包括：
1、許多研究證實(shí)，作為疫苗載體，VSV可以成為表達(dá)外源抗原蛋白，如HIV、埃博拉病毒(Ebola)等的高效平臺；
2、VSV復(fù)制周期短(約8小時復(fù)制一代)，易于培養(yǎng)，擴(kuò)增病毒所用BHK21細(xì)胞可高密度懸浮培養(yǎng)，這為以VSV為平臺制備的重組疫苗進(jìn)行工業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)提供了得天獨(dú)厚的優(yōu)勢；
3、VSV重組疫苗除了可有效激發(fā)肌體產(chǎn)生全面的免疫應(yīng)答，包括細(xì)胞免疫應(yīng)答、體液免疫應(yīng)答和粘膜免疫應(yīng)答之外，還具有快速激發(fā)免疫應(yīng)答的優(yōu)點(diǎn)，如：以VSV為載體制備的Ebola病毒應(yīng)急疫苗，已證實(shí)可在接種靈長動物3-5天內(nèi)激發(fā)免疫保護(hù)力。
鑒于VSV作為疫苗載體所具備的諸多優(yōu)點(diǎn)，本申請擬利用其研制針對仔豬和成年豬的PEDV應(yīng)急免疫疫苗。
發(fā)明內(nèi)容
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