[發(fā)明專利]一種直接雙酶電極及其在植酸酶活性測定中的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810411570.8 | 申請日： | 2018-05-02 |
| 公開（公告）號： | CN108680630B | 公開（公告）日： | 2020-04-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 史建國;王丙蓮;馬耀宏;公維麗;楊燕;孟慶軍;楊俊慧;蔡雷;鄭嵐;劉慶艾 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東省科學(xué)院生物研究所 |
| 主分類號： | G01N27/327 | 分類號： | G01N27/327 |
| 代理公司： | 濟南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205 | 代理人： | 于曉曉 |
| 地址： | 250014 山東省濟*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 直接 電極 及其 植酸酶 活性 測定 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種直接雙酶電極，其特征在于，所述直接雙酶電極的制備方法如下：
(1)將氧化石墨烯溶膠滴涂于金電極表面并烤干，然后采用電沉積法使次黃嘌呤氧化酶(XOD)0.04～0.06U和殼聚糖水溶液在金電極的表面直接共沉積成膜，其中，殼聚糖水溶液的pH為5.7～6.3；
(2)取嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)0.15～0.25U、5％血紅蛋白3.5～4.5ul、0.1％非離子表面活性劑TX-10 0.5～1.5ul，混勻，靜置5～10min，獲得混合液A；然后向混合液A中加入2.5％戊二醛1～3ul，混勻，獲得混合液B，將混合液B在1min之內(nèi)噴涂于步驟(1)獲得的電極表面，靜置固化18～22min；
(3)用蒸餾水沖洗步驟(2)獲得的電極表面，然后對電極冷凍干燥，獲得直接PNP-XOD雙酶電極。
2.如權(quán)利要求1所述的直接雙酶電極，其特征在于，在直接雙酶電極制備方法的步驟(1)中，將0.2％～0.6％氧化石墨烯溶膠滴涂于金電極表面并烤干，烤干溫度為50～66℃，然后在金電極的表面共沉積次黃嘌呤氧化酶(XOD)0.05U和0.1％～0.3％殼聚糖水溶液，并用氧化還原法進行修飾，其中，殼聚糖水溶液的pH為6.0。
3.如權(quán)利要求2所述的直接雙酶電極，其特征在于，在直接雙酶電極制備方法的步驟(1)中，將0.4％氧化石墨烯溶膠滴涂于金電極表面并烤干的過程時，烤干溫度為58℃。
4.如權(quán)利要求1所述的直接雙酶電極，其特征在于，在直接雙酶電極制備方法的步驟(2)中，取嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)0.2U、5％血紅蛋白4ul、0.1％非離子表面活性劑TX-101.0ul，混勻，靜置7min，獲得混合液A；然后向混合液A中加入2.5％戊二醛2ul，混勻，獲得混合液B，將混合液B在1min之內(nèi)噴涂于步驟(1)獲得的電極表面，靜置固化20min。
5.如權(quán)利要求1-4任一項所述的直接雙酶電極在植酸酶活性測定中的應(yīng)用，包括以下測定步驟：
(1)標準品定標1：1)生物感應(yīng)器清洗：將生物感應(yīng)器開機，開啟清洗泵、排空泵使三反應(yīng)體系緩沖液注入并排出檢測池，重復(fù)操作3～5次；2)生物感應(yīng)器平衡：將三反應(yīng)體系緩沖液注入檢測池中，開啟攪拌混勻裝置；3)標準品測定：運行檢測樣品程序，記錄電流初始數(shù)值I(n)始，然后向檢測池內(nèi)注入植酸酶標準品，記錄電流數(shù)值I(n)終，計算標準品的電流差值Bn，公式如下：Bn＝I(n)終-I(n)始；n為大于等于1的正整數(shù)；
(2)標準品定標2：1)重復(fù)步驟(1)中生物感應(yīng)器的清洗、平衡步驟，待用；2)標準品測定：運行檢測樣品程序，記錄電流初始數(shù)值I(n+1)始，然后向檢測池內(nèi)注入植酸酶標準品，記錄電流數(shù)值I(n+1)終，計算標準品的電流差值Bn+1，公式如下：Bn+1＝I(n+1)終-I(n+1)始；
當(dāng)Bn+1和Bn的RSD小于等于1％時，生物感應(yīng)器標定通過；
(3)植酸酶活性的測定：1)重復(fù)步驟(1)中生物感應(yīng)器的清洗、平衡步驟，待用；2)植酸酶活性的測定：運行檢測樣品程序，記錄電流初始數(shù)值I樣始，然后向檢測池內(nèi)注入植酸酶發(fā)酵液，記錄電流數(shù)值I樣終，計算樣品的電流差值B樣，并根據(jù)公式計算發(fā)酵液中植酸酶的活性Q樣，公式如下
B樣＝I樣終-I樣始
其中，Q標為植酸酶標準品的活性。
其中，所述三反應(yīng)體系溶液包括下述重量份數(shù)的組份：醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH6.0)90～110份、植酸2.0～2.5份、肌苷7.0～8.0份、FAD 0.05～0.15份、苯甲酸鈉1.0～2.0份、EDTA 0.05～0.15份。
6.如權(quán)利要求5所述的直接雙酶電極在植酸酶活性測定中的應(yīng)用，其特征在于，所述三反應(yīng)體系溶液包括下述重量份數(shù)的組份：醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH6.0)100份、植酸2.2份、肌苷7.5份、FAD 0.1份、苯甲酸鈉1.5份、EDTA 0.1份。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于山東省科學(xué)院生物研究所，未經(jīng)山東省科學(xué)院生物研究所許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810411570.8/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
