[發(fā)明專利]一種免雙氧水快速檢測半胱氨酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810411187.2
• 申請日: 2018-05-02
• 公開（公告）號: CN108489921B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉亞青;李云飛;王碩
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 天津合正知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12229
• 代理人: 陳松

本發(fā)明公開了一種免雙氧水快速檢測半胱氨酸的方法，其主要是基于新合成的天冬氨酸?鈰納米材料(Ce?Asp)具有類氧化酶的活性，在有機(jī)底物3，3’5，5’?四甲基聯(lián)苯胺(TMB)存在時(shí)會(huì)發(fā)生氧化反應(yīng)，TMB就會(huì)從無色氧化成藍(lán)色，而在加入半胱氨酸的情況下，會(huì)抑制其氧化反應(yīng)，TMB就不會(huì)發(fā)生顏色變化，本發(fā)明即是通過這種比色方法來進(jìn)行檢測半胱氨酸。本發(fā)明提供的方法非常簡單、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、檢測速度快，可開發(fā)相關(guān)試劑盒、試紙條，能夠滿足現(xiàn)場快速、準(zhǔn)確的檢測要求，可應(yīng)用于食品安全檢測、疾病分析、環(huán)境分析等領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)分析領(lǐng)域，具體涉及一種氨基酸的快速檢測方法。本發(fā)明屬于檢測技術(shù)領(lǐng)域，

背景技術(shù)

半胱氨酸是人體必需氨基酸的一種，是脂肪族中含巰基的極性α-氨基酸。半胱氨酸是一種氨基酸解毒藥，參與肝臟細(xì)胞的還原和磷脂代謝過程，保護(hù)肝細(xì)胞受損，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，藥理作用旺盛。主要用于放射性藥物中毒，重金屬中毒，銻中毒等，也可用于肝炎，中毒性肝炎，血清病，并可預(yù)防肝壞死。目前，已經(jīng)報(bào)道了多種分析技術(shù)來檢測半胱氨酸，包括光譜學(xué)，電化學(xué)方法，高效液相色譜法，電感耦合等離子體質(zhì)譜法等等(Langmμir theAcsJoμrnal of SμrfacesColloids，29(16)，5085-92.)，但是其中大部分都是耗時(shí)的，而且對選擇性有限，通常需要昂貴的儀器，不適合現(xiàn)場條件下的快速分析。除此之外還有一些用催化TMB顯色的方法來檢測Cys(Analyst，2015，140，5251-5256)，但這些方法都需要雙氧水存在條件下進(jìn)行，而雙氧水特別不穩(wěn)定，對檢測結(jié)果準(zhǔn)確度有一定的影響。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上存在的問題，我們合成了一種新型的天冬氨酸-鈰納米材料，開發(fā)了一種無雙氧水，免標(biāo)、快速檢測半胱氨酸的新方法。其操作過程簡單，成本低，檢測結(jié)果具有良好的重現(xiàn)性，確保了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明創(chuàng)造的技術(shù)方案如下：

對目標(biāo)物實(shí)現(xiàn)高精準(zhǔn)、高靈敏、簡單的快速檢測方法是分析化學(xué)的一個(gè)重要發(fā)展方向。本發(fā)明提供了一種簡便快速檢測半胱氨酸的方法。本方法先將Ce-Asp與不同濃度Cys混合，在室溫孵育10min，再加入TMB，反應(yīng)10min，TMB的氧化被抑制，至其顏色變化及紫外吸收值也被抑制，其顏色變化強(qiáng)弱及吸收值的大小與Cys濃度呈線性相關(guān)，通過觀察其顏色變化強(qiáng)度，并通過紫外分光光度儀測量其吸光度即可實(shí)現(xiàn)對Cys的快速檢測。

本發(fā)明具體包括以下步驟：

(1)首先利用Asp和Ce(NO₃)₃制備Ce-Asp納米復(fù)合材料，基本步驟如下：將1.0mMNaOH和1.0mM Asp加入到6mL醇中并震蕩10分鐘，接下來，將1.0mMCe(NO₃)₃溶解在1.0mL去離子水中，將Ce(NO₃)₃水溶液加入到NaOH和Asp的混合物中并震蕩20min，然后6000rpm轉(zhuǎn)速離心6min收集沉淀，并用無水乙醇洗滌三次即可；

(2)然后在0.6mM步驟(1制備的)Ce-Asp納米復(fù)合材料溶液中，加入0-10μM不同濃度的半胱氨酸Cys溶液，孵育10min后再加入150μM TMB，反應(yīng)10min，反應(yīng)用9.2mM硫酸終止，再通過紫外分光光度儀測量在451nm處的吸光度值；

(3)TMB，Ce-Asp與不同濃度Cys反應(yīng)，用硫酸終止反應(yīng)后通過紫外分光光度儀測定反應(yīng)體系的吸收光譜，以451nm處最高吸光值強(qiáng)度為輸出檢測信號，加入Cys后傳感體系的吸收值與Cys濃度間存在線性關(guān)系，然后以451nm處TMB的紫外吸收值為縱坐標(biāo)，以Cys濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行處理做線性關(guān)系，據(jù)此得到擬合曲線及線性回歸方程：y＝-0.1374x+1.56574，R＝0.9987，檢測限為80nM。